Kaksi yleisesti käytettyä mikroskooppista havainnointimenetelmää
1, Pimeän kentän havainto
Tumma näkökenttä on itse asiassa tumman kentän valaistus Sen ominaisuudet poikkeavat kirkkaasta näkökentästä, koska se ei havainnoi suoraan valaisevaa valoa, vaan pikemminkin tarkkailee tarkastettavan kohteen heijastunutta tai taipunutta valoa. Siksi näkökentästä tulee tumma tausta, kun taas tarkastettava kohde antaa kirkkaan kuvan
Pimeän kentän periaate perustuu optiseen Tyndall-ilmiöön, jossa pölyhiukkasia ei ihmissilmä pysty havaitsemaan voimakkaalle valolle johtuen vahvan valon aiheuttamasta diffraktiosta. Jos valo heijastuu siihen vinosti, hiukkasten tilavuus näyttää kasvavan valon heijastuksen seurauksena, jolloin ne näkyvät ihmissilmälle.
Pimeän kentän havainnointiin tarvittava erikoislisävaruste on pimeän kentän kohdevalo Sen ominaispiirre on, että se ei päästä valonsädettä kulkemaan kohteen läpi alhaalta ylös, vaan muuttaa valon kulkureittiä vinosti kohdetta kohden siten, että valaistusvalo ei pääse suoraan objektiivin linssiin ja käyttää heijastuksen tai diffraktiovalon muodostamaa kirkasta kuvaa kuin havaintokentän tumma tarkkuus havaintokentässä on paljon korkeampi kuin havaintokentän kirkkaassa kentässä. saavuttaen jopa 0,02-0,004
2, vaihekontrastipeilin tarkastusmenetelmä
Vaihekontrastimikroskopian onnistunut keksintö optisten mikroskooppien kehityksessä on tärkeä saavutus nykyaikaisessa mikroskooppitekniikassa Tiedämme, että ihmissilmä pystyy erottamaan vain valoaaltojen aallonpituuden (värin) ja amplitudin (kirkkauden). Värittömien ja läpinäkyvien biologisten näytteiden aallonpituus ja amplitudi eivät muutu paljon, kun valo kulkee läpi, mikä vaikeuttaa näytteen tarkkailua kirkkaassa kentässä.
Vaihekontrastimikroskooppi hyödyntää tarkastettavan kohteen optisen reitin pituuden eroa peilitarkastuksessa ja hyödyntää tehokkaasti valon interferenssiilmiötä muuntaakseen vaihe-eron, jota ihmissilmä ei pysty erottamaan, erottuvaksi amplitudieroksi. Jopa värittömät ja läpinäkyvät aineet voivat tulla selvästi näkyviin Tämä helpottaa huomattavasti elävien solujen havainnointia, joten käänteismikroskoopeissa käytetään laajalti faasikontrastimikroskooppia
Vaihekontrastimikroskopian perusperiaate on muuntaa näytteen läpi kulkevan näkyvän valon optisen polun ero amplitudieroksi, mikä parantaa eri rakenteiden välistä kontrastia ja tekee niistä selkeät ja näkyvät. Näytteen läpi kulkemisen jälkeen valo taittuu, poikkeaa alkuperäisestä optisesta reitistä ja viivästyy 1/4 λ:lla (aallonpituus). Jos optista polkueroa suurennetaan tai pienennetään vielä 1/4 λ, optisen polun erosta tulee 1/2 λ ja kahden valonsäteen välinen interferenssi kasvaa tai vähenee akselin yhdistämisen jälkeen, mikä parantaa kontrastia Rakenteeltaan vaihekontrastimikroskoopeilla on kaksi
erityisiä eroja tavallisiin optisiin mikroskoopeihin:
1. Rengasmainen kalvo sijaitsee valonlähteen ja lauhduttimen välissä, ja sen tehtävänä on muodostaa ontto valokartio, joka kulkee lauhduttimen läpi ja keskittyy näytteeseen
2. Kulmafaasilevy: Objektiivin linssiin lisätään magnesiumfluoridilla päällystetty vaihelevy, joka voi viivästyttää suoran tai taipuneen valon vaihetta 1/4 λ:lla. Se voidaan jakaa kahteen tyyppiin:
(1) . A+vaihelevy: Viivästyttää suoraa valoa 1/4 λ:lla ja lisää kaksi valoaaltosarjaa akselien yhdistämisen jälkeen. Amplitudi kasvaa ja näytteen rakenteesta tulee kirkkaampi kuin ympäröivä väliaine, mikä muodostaa kirkkaan kontrastin (tai negatiivisen kontrastin)
(2) . B+vaihelevy: Viivästyttää taipunutta valoa 1/4 λ:lla ja vähennä valoaallot, kun olet yhdistänyt kahden valonsäteen sarjan akselit, mikä johtaa amplitudin laskuun ja tumman kontrastin (tai positiivisen kontrastin) muodostumiseen. Rakenteesta tulee tummempi kuin ympäröivä väliaine
