Biologisten näytteiden valmistelu ja tarkkailu elektronimikroskopiaa varten
Mikroskoopin resoluutio riippuu käytetyn valon aallonpituudesta. Elektronimikroskooppi, joka alkoi ilmestyä vuonna 1933, käyttää valonlähteenä elektronisuihkua, jonka aallonpituus on paljon lyhyempi kuin näkyvän valon aallonpituus, joten sen saavuttama resoluutio on huomattavasti parempi kuin optisen mikroskoopin. Valonlähteiden ero määrittää myös joukon eroja elektronimikroskooppien ja optisten mikroskooppien välillä.
Elektronisuihkukuvauksen periaatteiden erojen ja erilaisten näytteiden vaikutustapojen mukaan nykyaikaiset elektronimikroskopit ovat kehittyneet monenlaisiksi. Tällä hetkellä yleisimmin käytettyjä ovat transmissioelektronimikroskoopit ja pyyhkäisyelektronimikroskoopit. Edellisen kokonaissuurennus voi olla välillä 1000-1000000. Jälkimmäisen kokonaissuurennus voi vaihdella välillä 20-300,000 kertaa. Tämä koe esittelee pääasiassa kahden tyyppisten mikroskooppien, transmissioelektronimikroskoopin ja pyyhkäisyelektronimikroskoopin, valmistuksen.
2. Laitteet
1. Bakteerit Escherichia coli (Escherichia coli) vino.
2. Liuos tai reagenssi amyyliasetaatti, väkevä rikkihappo, absoluuttinen etanoli, steriili vesi, 2 % natriumfosfotungstaatti (pH 6.5-8.0) vesiliuos, 0,3 % polyeteeni formaldehydi (kloroformiin liukeneva) liuos, solut Pigmentti c, ammoniumasetaatti, plasmidi pBR322.
3. Instrumentit tai muut välineet: tavallinen optinen mikroskooppi, kupariverkko, posliinisuppilo, dekantterilasi, astia, steriili tiputin, steriilit pinsetit, tapit, objektilasit, laskentalauta, tyhjiöpäällystyskone, kriittisen pisteen kuivausrumpu jne.
3. Käyttövaiheet
(1) Näytteen valmistelu ja tarkkailu transmissioelektronimikroskooppia varten
1. Metalliverkon käsittely
Näyte optista mikroskopiaa varten asetetaan lasilevylle tarkkailua varten. Kuitenkin transmissioelektronimikroskoopiassa, koska elektronit eivät voi tunkeutua lasilevyn läpi, verkkomateriaaleja voidaan käyttää vain kantoaineina, joita yleensä kutsutaan kantoverkoiksi. Kantoverkko voidaan jakaa useisiin eri spesifikaatioihin eri materiaalien ja muotojen vuoksi, joista yleisin on 200-400 mesh (reikien lukumäärä) kupariverkko. Kupariverkko on käsiteltävä ennen käyttöä lian poistamiseksi ja sen pitämiseksi puhtaana, muuten se vaikuttaa tukikalvon laatuun ja näytekuvien selkeyteen. Tässä kokeessa käytetään 400-verkkokupariverkkoa, jota voidaan käsitellä seuraavasti: liota ja valkaise ensin amyyliasetaatilla useita tunteja, sitten huuhtele se tislatulla vedellä useita kertoja ja liota sitten absoluuttisessa etanolissa nestehukka. Jos kupariverkko ei ole vieläkään puhdas yllä olevien menetelmien jälkeen, voit liottaa sitä laimeassa väkevässä rikkihapossa (1:1) 1-2 minuuttia tai keittää 1-prosenttisessa NaOH-liuoksessa muutaman minuutin ajan, huuhdella tislatulla vettä useita kertoja ja laita se sitten vedettömään Kuivaa etanoliin ja aseta sivuun.
2. Tukikalvon valmistelu
Näytteitä tarkasteltaessa kantoverkko tulee myös peittää kerroksella strukturoimatonta, yhtenäistä kalvoa, muuten kantoverkon rei'istä vuotaa pieniä näytteitä. Tätä kalvoa kutsutaan yleensä tukikalvoksi tai kantokalvoksi. Tukikalvon tulee olla elektronin läpinäkyvä, ja sen paksuuden tulisi yleensä olla alle 20 nm; elektronisäteen vaikutuksesta kalvolla tulisi olla myös tietty mekaaninen lujuus, jotta se ylläpitää rakenteellista vakautta ja sillä on hyvä lämmönjohtavuus; Lisäksi tukiverkkoa tulee käyttää elektronimikroskopiassa. Sen alla ei saa olla näkyvää rakennetta, kemiallista reaktiota kuljetettavan näytteen kanssa eikä näytteen havainnointia häiritä. Sen paksuus on yleensä noin 15 nm. Tukikalvo voi olla muovikalvo (kuten kolloodikalvo, polyeteeniformaldehydikalvo jne.), hiilikalvo tai metallikalvo (kuten berylliumkalvo jne.). Normaaleissa työoloissa muovikalvo voi täyttää vaatimukset. Muovikalvoista kolloodikalvo on suhteellisen helppo valmistaa, mutta sen lujuus ei ole yhtä hyvä kuin polyeteeniformaldehydikalvo.
