Miksi öljylinssin suurennus on suurempi kuin tavallisen objektiivin?
Syitä, miksi bakteerit täytyy korjata ennen värjäystä mikrobiologisissa kokeissa:
1: Tappaa soluja, on helppo värjätä väriaineella.
2: Saa bakteerit tarttumaan lasilevyyn, eikä sitä ole helppo pestä pois vedellä.
Kiinnityksen yhteydessä se tulee kuivata hitaasti. Jos todella haluat nopeuttaa, voit kuivata sen muutaman kerran etäältä alkoholilampun liekin yläpuolella. Älä anna lasin liukua lämmetä, muuten se voi tuhota bakteerien elämänmuodon.
Gram-värjäys ja bakteerien mikroskooppinen havainnointi
1. Kokeellinen periaate
Gram-värjäysperiaate: Bakteerit reagoivat eri tavalla Gram-värjäykseen soluseinien koostumuksen ja rakenteen vuoksi. Gram-positiivisten bakteerien soluseinä on pääasiassa peptidoglykaanin muodostama verkkosolmu. Etanolilla käsiteltäessä verkkorakenteen huokoskoko pienenee kuivumisen vuoksi ja läpäisevyys pienenee, jolloin kristallivioletti-jodikompleksi Aine ei ole helppo eluoitua ja pysyä solussa, ja sini- ensisijaisen värjäysaineen violetti väri säilyy edelleen värinpoiston ja vastavärjäyksen jälkeen. Gram-negatiivisten bakteerien soluseinän peptidoglykaanikerros on ohut ja lipidipitoisuus korkea, joten värinpoistokäsittelyssä lipidi liukenee etanoliin (tai asetoniin) ja soluseinän läpäisevyys kasvaa, joten että kristallivioletti-jodikompleksi Se on helpompi eluoitua ja vastavärjäyksen jälkeen solut värjätään vastavärin punaisella värillä. Mikroskoopin kuvantamisperiaate: Nykyaikaiset tavalliset optiset mikroskoopit käyttävät kahta linssijärjestelmää, okulaari- ja objektiivilinssiä kuvan suurentamiseen, joten niitä kutsutaan usein yhdistelmämikroskoopeiksi. Mikroskoopin optisessa järjestelmässä objektiivilinssin suorituskyky on kriittisin ja öljylinssin suurennus on suurin, mikä on mikrobiologisen tutkimuksen kannalta tärkeintä. Upotusöljyn lisäämisen lasilevyn ja linssin väliin päätarkoitus on lisätä valaistuksen kirkkautta ja lisätä mikroskoopin resoluutiota. Öljyä käytetään ilman sijasta valonläpäisyaineena vähentämään valon taittumista tai kokonaisheijastusta ja tekemään havaitusta kuvasta selkeämpi.
2. Koelaitteet
1. Pesäkkeet:
Escherichia coli 24h ravinneagar vinoviljelmä,
Staphylococcus aureus noin 24h ravinneagar vinoviljelmä, Bacillus subtilis 12-18h ravinneagar vinoviljelmä.
2. Liuokset tai reagenssit:
Tislattu vesi, jodiliuos, kristalliviolettivärjäysliuos, 95-prosenttinen alkoholi, safraniinivärjäysliuos, setriöljy. 3. Laite:
Mikroskooppi, objektilasi, inokulaatiosilmukka, alkoholilamppu, pinsetit, linssipaperi.
3. Kokeiluvaiheet
a:
1. Levitä
Ota objektilasi ulos, sytytä objektilasi, polta levyllä oleva alkoholi ja steriloi se, laita pieni pisara tislattua vettä keskelle, käytä rokotussilmukkaa poimimaan varovasti pieni määrä bakteereita testin vinolta alustalta. putki, koko prosessin ajan koeputken suun tulee olla alkoholilampun yläpuolella, ja nopeuden tulee olla nopea, jotta estetään viljelyalustan kontaminaatio. Levitä sitten pienet vesipisarat lasilevylle pyörivin liikkein, pysähdy, kun vesipisarat ovat sameita ja odota niiden kuivumista ja kiinnittymistä.
2. Ensivärjäys
Pudota kristalliviolettia (on sopivaa vain peittää bakteerikalvo) pesäkkeen päälle, värjää 1-2 minuuttia, kaada värjäysliuos pois ja huuhtele hienolla vedellä objektilasin päältä, kunnes eluaatti on väritöntä, ja aseta tahra liukulevylle. Ravista vesi pois viipaleista.
3. Mordant
Lisää jodiliuosta tipoittain huuhtelemaan pois jäännösvesi, peitä noin 1 min ja pese vedellä.
4. Värinpoisto
Ravista vesi pois lasilevyltä, kallista lasilevyä ja lisää 95-prosenttista alkoholia värin poistamiseksi valkoisen taustan alle, kunnes ulos virtaava alkoholi ei vain näytä siniseltä, huuhtele alkoholi välittömästi vedellä ja aseta lasilevy Ravista vesi pois viipaleilta.
5. Vastavärjäys
Vastavärjä safraniiniliuoksella noin 1-2 minuuttia, pese vedellä ja pyyhi sitten kuivaksi imukykyisellä paperilla
6. Mikroskooppinen tutkimus:
Etsi bakteeripesäke, jota tarkkaillaan pienen suurennoslinssin alta (jatka liukusäätimen liikuttamista, jos tunnet punaisen varjon, lopeta heti, säädä suurennusta, jos se ei ole pesäke, jatka etsimistä), nosta linssin piippua, ja vaihda sitten öljypeiliin. Lisää pisara seetriöljyä näytealueelle ja laske linssin säiliö varovasti alas karkeasäätimellä niin, että öljylinssi on upotettu öljyyn ja melkein koskettaa näytettä. Nosta lauhdutin korkeimpaan asentoon ja avaa aukko kokonaan, nosta linssin säiliötä karkeasäätimellä hitaasti, kunnes kohteen kuva ilmestyy näkökenttään, ja käytä hienosäädintä sen kirkkaamiseksi ja tarkentamiseksi.
