Mitä näytetietoja tarvitaan valomikroskopiaan?
Optisen mikroskoopin näytteenvalmistusprosessissa näytteen viipaleen paksuus on välillä 2-25um; elektronimikroskoopin viipaleen paksuus on 50-100nm sisällä (paitsi suurjänniteelektronimikroskooppi, jonka näytteen paksuus voi olla 1 um), joten käytetty viipalemenetelmä ei ole sama.
Kantajan kannalta optisen mikroskoopin osan kantaja on lasilevy, kun taas elektronimikroskoopin osan kantaja on ristikko.
Kiinnityksen kannalta optisen mikroskoopin viipaleet kiinnitetään yhdistefiksatiivilla, kun taas elektronimikroskoopin viipaleet kiinnitetään toistuvasti yhdellä kiinnitysaineella.
Värjäyksen kannalta optisten näytteiden värjäys on suhteellisen yksinkertaista. Erilaisten havainnointinäytteiden ja optisten mikroskooppien mukaan yleensä riittää värjäys jollakin kiinteällä värjäysaineella. Elektronimikroskoopin näytteiden uudelleenvärjäykseen on olemassa monia ja monimutkaisia menetelmiä, kuten negatiivivärjäys, hopeavärjäys ja niin edelleen.
Mitä tulee upotukseen, parafiinia, kolloodia, gelatiinia jne. käytetään upotusaineina optisissa mikroskoopin leikkeissä; epoksihartsia, polystyreenihartsia, isobutyleenihartsia ja vesiliukoista hartsia käytetään upotusaineina elektronimikroskoopin osissa.
Jotta voidaan varmistaa, että mikroskoopin näkökenttä voidaan valaista tasaisesti ja täysin, valaistuksen optinen järjestelmä on säädettävä, kun mikroskooppi asennetaan ensimmäisen kerran ja virheenkorjaus tehdään. Tämä on tärkeä keino ja yksinkertaisin tapa käyttää mikroskooppia oikein ja saada oikeat ja luotettavat tulokset. vaatimukset. Lisäksi valaistuksen optisen polun järjestelmän oikea säätö on välttämätön vaihe valonlähteen polttimoiden vaihdon jälkeen mikroskoopin käytön aikana, ja se on myös välttämätön keino tarkistaa mikroskoopin suorituskyky ajoittain päivittäin. käyttää. Mikroskoopin valaistuksen optisen polun järjestelmän säätö sisältää pääasiassa seuraavat neljä kohtaa: 1. Valonlähteen lampun kammion alustava säätö mikroskoopin ulkopuolella ① Avaa ensin lamppukammion kuori, paina jousiklipsiä asettaaksesi halogeenipolttimo pistorasiaan ja vältä suoraa kosketusta polttimoon sormillasi asennuksen aikana (voidaan erottaa pehmeällä kankaalla tai paperilla), jotta polttimossa ei ole sormenjälkiä ja muuta likaa, mikä vaikuttaa polttimon käyttöikään. ②Aseta lamppupesä pöydälle, virran kytkemisen jälkeen säädä erityisellä ruuvitaltalla lampun tarkennusnupin reikää (merkitty "←→"), niin että hehkulanka heijastuu seinään 1-2 m päässä, ja hehkulangan kuvaa säädetään. Säädä sitten lampun korkeus ja säädä kierrereikä (merkitty "──") niin, että hehkulangan asento on sopiva; säädä sitten lampun vasen ja oikea asento säätääksesi ruuvinreikää (merkitty "──") niin, että hehkulangan vasen ja oikea asento on sopiva .
2. Valonlähteen valaisimen (filamentin) sijainnin tarkastuksen ja korjaamisen mikroskoopissa tarkoituksena on säätää valaisimen kuvan pää suoraan objektiivin näkökenttään ja varmistaa, että mikroskooppi on täysin ja tasaisesti valaistu valonlähteen näkökulmasta. Valaistus, joka on Kuhler-valaistusjärjestelmän säätämisen edellytys. Tarvittavat perustyökalut: Keskitysteleskooppi on mukana mikroskoopin oston yhteydessä. ① Irrota lamppukotelon himmeä lasiholkki ja aseta lamppupesä takaisin mikroskoopille. ② Valitse 10× objektiivi, käynnistä valonlähdeohjelma löytääksesi näytteen ja tarkenna se selkeästi ja käytä sitten 40× objektiivilinssiä tarkentaaksesi näyte selkeästi (40× objektiivi Näet koko kuvan hehkulangasta ); ③ Avaa lauhduttimen aukkokalvo ja kenttäkalvo maksimissaan; ④ Irrota toinen okulaarista, vaihda keskitysteleskoopilla, tartu valkoiseen osaan, vedä mustaa okulaaria toisella kädellä. Näet hehkulangan kuvan näkökentässä; ⑤ Jos filamentin asento ei ole sopiva, säädä "──"-reikä säätääksesi filamentin kuvaa vaakasuunnassa ja säädä "──"-reikä säätääksesi filamentin kuvaa pystysuunnassa, kunnes Säädä filamentin kuvaa. vaaleaan pyöreään kuvaan, joka juuri täyttää objektiivin aukon; ⑥ Aseta säädön jälkeen himmeä lasiholkki takaisin alkuperäiseen asentoonsa, irrota keskitysteleskooppi ja aseta okulaari seuraavaa säätöä varten. Yllä mainittu valaistuksen valonlähteen lampun kammion säätö mikroskoopin ulkopuolella ja valonlähteen valokappaleen sijainnin tarkistaminen mikroskoopin sisällä on suoritettava vain mikroskoopin ensimmäisen asennuksen ja virheenkorjauksen yhteydessä sekä lampun vaihdon yhteydessä. , ja mikroskooppia ei voi säätää satunnaisesti mikroskooppia käytettäessä. Epäselvyyden sattuessa se voidaan säätää takaisin alkuperäiseen tilaan yllä olevien vaiheiden mukaisesti.
3. Kohler-valaistusjärjestelmän oikea säätö Yksi mikroskoopin oikean säädön päätehtävistä on valaistuksen optisen polkujärjestelmän säätö, ja avain on Kohler-valaistusjärjestelmän säätö. Jokaisella mikroskooppia käyttävällä henkilöllä, varsinkin mikrovalokuvien ottajalla, tulisi olla tietty ymmärrys ja hallinta Kuhler-valaistusjärjestelmän periaatteesta ja sen säätövaiheista, jotta mikroskoopin toiminnot ja kuvien ottaminen olisivat täysin mahdollisia. Esiin tulevat valokuvat voivat olla johdonmukaisempia ja täydellisempiä. Kohler-valaistusjärjestelmän periaate on yksinkertainen: minkä tahansa valonlähteen valaisimen pisteen lähettämä valo voi valaista mikroskoopin näkökenttää, ja valonlähteen valaisimen kunkin pisteen lähettämä valo kerätään ja kentällä. mikroskoopin näkökulmasta Saavutetaan erittäin täydellinen ja tasainen valaistus. Kuhler-valaistusjärjestelmän säädön tarkoituksena on saada tasainen ja riittävä valaistus havaittavaan näkökenttään sekä estää hajavaloa vaikuttamasta tai häiritsemästä kuvantamisjärjestelmää, jotta vältetään huurtuminen filmiin valokuvauksen aikana. Tarvittavat komponentit korkeasäätöiseen Kohler-valaistusjärjestelmään: kenttäkalvo, kondensaattorilinssijärjestelmä, joka voidaan säätää akselille. ① Valitse 10× objektiivilinssi ja 10× okulaari ② Aseta kondensaattorin etulinssi optiselle reitille, säädä aukon kalvo kohtuulliseen asentoon (ei liian suuri tai pieni) ja nosta sitten kondensaattori yläasentoon ja säädä lauhduttimen kääntöpöytä kirkkaan kentän "J" asentoon ③ Säädä kentän kalvo minimiin (0,1)
④ Aseta sinetöity biologinen näyte lavalle, kytke valonlähde päälle ja tarkenna selvästi
⑤ Näkökentässä on osittain valaistu alue tai kirkas piste, joka on kenttäkalvon epäselvä kuva, jossa näytteen yksityiskohdat näkyvät selvästi; sen ulkopuolella on tummempi näkökenttä, joka ei välttämättä näe näytteen yksityiskohtia selvästi
⑥ Säädä kondensaattoria hieman alaspäin, jotta näkökentän kirkas piste pienenee vähitellen ja muuttuu vähitellen selkeäksi monikulmioksi, joka on kenttäkalvon selkeä kuva;
⑦Yleensä monikulmiokuva ei ole näkökentän keskellä, ja on tarpeen säätää lauhduttimen keskitysruuviparia, jotta kenttäkalvon monikulmiokuva voidaan säätää keskiasentoon;
⑧ Avaa asteittain näkökentän kalvo, jotta monikulmiokuvasta tulee näkökentän piirretty monikulmio, ja tarkista edelleen kohdistuksen tila. Jos kohdistus ei ole ihanteellinen, jatka kohdistusruuvin hienosäätöä;
⑨Avaa hieman näkökentän kalvoa niin, että sen monikulmiokuva vain katoaa näkökentän reunalle. Tähän mennessä Kohler-valaistusjärjestelmän säätö on valmis. Kun Kohler-valaistusjärjestelmä on säädetty, koko näkökenttä on tasaisesti valaistu, ja otetut mikrokuvat ovat kirkkaita ja selkeitä normaalikontrastilla.
