Millaista mikroskooppia käytetään mikrobisolujen muodon näkemiseen
Yhteisnimitys kaikille pienille organismeille, joita yksilöiden on vaikea havaita paljain silmin. Mikro-organismeja ovat bakteerit, virukset, sienet ja muutamat levät. (Jotkut mikro-organismit ovat kuitenkin näkyvissä paljaalla silmällä, kuten sieniin kuuluvat sienet, Ganoderma lucidum jne.) Virukset ovat eräänlaisia "ei-soluisia organismeja", jotka koostuvat muutamista komponenteista, kuten nukleiinihapoista ja proteiineista, mutta niiden selviytymisen täytyy riippua elävistä soluista. Erilaisten ympäristöjen mukaan ne voidaan jakaa prokaryoottisiin mikro-organismeihin, avaruusmikro-organismeihin, sieni-mikro-organismeihin, hiivamikro-organismeihin, meren mikro-organismeihin jne.
Mikro-organismien rooli ja haitat:
Yksi tärkeimmistä mikro-organismien ihmisiin kohdistuvista vaikutuksista on tartuntatautien esiintyvyys. 50 prosenttia ihmisten sairauksista johtuu viruksista. Ihmisten sairauksia aiheuttavien mikrobien historia on ihmisten jatkuvan taistelun historiaa niitä vastaan. Ihminen on edistynyt suuresti sairauksien ehkäisyssä ja hoidossa, mutta uusia ja uudelleen ilmaantuvia mikrobiinfektioita ilmaantuu edelleen, kuten suuri joukko virussairauksia, joista puuttuu tehokkaita terapeuttisia lääkkeitä. Joidenkin sairauksien patogeeninen mekanismi ei ole selvä. Useiden laajakirjoisten antibioottien väärinkäyttö on aiheuttanut voimakasta valintapainetta, jolloin monet kannat ovat muuntuneet, mikä johtaa lääkeresistenssin syntymiseen ja ihmisten terveyttä uhkaavat uudet uhat. Jotkut segmentoidut virukset voivat mutatoitua rekombinaation tai uudelleenlajittelun kautta. Tyypillisin esimerkki on influenssavirus.
Tiettyään mikro-organismien tarkemman määritelmän, minkä tyyppistä mikroskooppia kokeilijan tulee käyttää tutkiessaan mikro-organismeja nähdäkseen ja millä mikroskoopilla voidaan nähdä paremmin sekä tarkkailla ja analysoida tavallisia mikrobimuotoja.
Mikroskoopin keksintö on pystyä näkemään hymyileviä esineitä, joita ei voi nähdä paljaalla silmällä. Mikro-organismien koko on hyvin pieni, joten niitä on suurennettava ja tarkkailtava mikroskoopin avulla. Lisäksi mikro-organismeja on monenlaisia, joten periaatteessa suurin osa optisista mikroskoopeista voi Mikro-organismien tarkkailemiseksi seuraava kysymys on, minkä tyyppistä mikroskooppia tulisi käyttää mikro-organismien havainnointiin ja analysointiin. Yleisiä mikroskooppeja mikrobien morfologian havainnointiin ovat biologiset mikroskoopit, faasikontrastimikroskoopit, käänteismikroskoopit, fluoresenssimikroskoopit ja konfokaalimikroskoopit. Mikroskooppi ja niin edelleen.
Seuraavassa kuvataan erilaisia mikroskooppeja, joita käytetään mikro-organismien tarkkailuun:
1. Tavallinen valomikroskooppi
Valonlähteenä käytetään luonnonvaloa tai valoa, jonka aallonpituus on noin {{0}},4 μm. Mikroskoopin resoluutio on puolet aallonpituudesta eli 0,2 μm, ja pienin paljaalla silmällä näkyvä kuva on 0,2 mm. Siksi öljypeilin (immersio) käyttäminen 1000-kertaiseksi suurentaa 0,2 μm:n hiukkaset 0,2 mm:iksi, jotka näkyvät paljaalla silmällä. Tavallisia optisia mikroskooppeja voidaan käyttää bakteerien, aktinomykeettien ja sienten havainnointiin.
2. Darkfield-mikroskopiaa käytetään yleisesti värjäytymättömien mikrobien morfologian ja liikkeen tarkkailuun. Kun tummakenttäkondensaattori on asennettu tavalliseen mikroskooppiin, valo ei pääse tunkeutumaan suoraan keskeltä ja näkökenttä on tumma. Kun näyte saa vinoa valoa lauhduttimen reunalta, se voi sirota, jolloin tummalla kentän taustalla voidaan havaita kirkkaita mikro-organismeja, kuten bakteereja tai spirokeetteja.
3. Vaihekontrastimikroskooppi Vaihekontrastimikroskooppi käyttää vaihe-erolevyn valovaikutusta suoran valon valon vaiheen ja amplitudin muuttamiseksi sekä valon vaiheen eron muuttamiseksi valon intensiteetin eroksi. Faasikontrastimikroskoopilla valon kulkiessa värjäytymättömän näytteen läpi valofaasierot johtuvat näytteen eri osien tiheyden epäyhtenäisyydestä, jolloin voidaan havaita mikro-organismien morfologia, sisäinen rakenne ja liiketapa.
4. Fluoresenssimikroskooppi Fluoresenssimikroskooppi on periaatteessa sama kuin tavallinen optinen mikroskooppi, suurin ero on valonlähde, suodatin ja lauhdutin. Tällä hetkellä useimmat käyttävät epi-light-laitteita, ja valonlähteinä käytetään yleisesti korkeapaineisia elohopealamppuja, jotka voivat lähettää ultravioletti- tai siniviolettivaloa. Suodattimia on kahdenlaisia: virityssuodatin ja absorptiosuodatin. Yleisten kirkkaiden kenttien lauhduttimien lisäksi tummakenttäkondensaattoreita voidaan käyttää myös fluoresenssimikroskoopeissa, joissa käytetään sinistä valoa fluoresenssin ja taustan välisen kontrastin parantamiseksi. Tätä menetelmää voidaan soveltaa fluoresoivilla pigmenteillä värjättyjen tai fluoresoivien vasta-aineiden kanssa yhdistettyjen bakteerien havaitsemiseen tai tunnistamiseen.
5. Elektronimikroskoopit käyttävät elektronivirtaa valonlähteenä. Näkyvään valoon verrattuna aallonpituus on kymmeniätuhansia kertoja erilainen, mikä parantaa resoluutiota huomattavasti. Magneettikelaa käytetään optisena vahvistusjärjestelmänä, ja suurennus voi olla kymmeniä tuhansia tai satoja tuhansia kertoja. Sitä käytetään usein viruspartikkeleissa. ja bakteerien ultrarakenteen havainnointi.
Värjäämättömien mikrobinäytteiden tarkkailu:
Värjäämättömiä näytteitä voidaan yleensä käyttää bakteerien morfologian, voiman ja liikkeen tarkkailuun. Bakteerit ovat värittömiä ja läpinäkyviä värjäämättöminä, ja ne havaitaan mikroskoopilla pääasiassa bakteerien taitekertoimen ja ympäröivän ympäristön välisen eron perusteella. Bakteerit, joissa on siimat, liikkuvat voimakkaasti, kun taas bakteerit, joissa ei ole siipiä, osoittavat epäsäännöllistä Brownin liikettä. Elinkykyisillä bakteereilla, kuten Treponema pallidum, Leptospira ja Campylobacter, on erottuva muoto ja liikemallit, joilla on diagnostista merkitystä. Yleisesti käytetyt menetelmät ovat paineenpudotusmenetelmä, riippupudotusmenetelmä ja kapillaarimenetelmä.
1. Riippuva pudotusmenetelmä Levitä vaseliinia puhtaan koveran lasilevyn koveran reiän ympärille, ota bakteerisuspension rengas rokotussilmukalla ja aseta se kansilasin keskelle ja kohdista koveran lasilevyn kovera reikä pisara kansilasin keskelle ja Laita kansi päälle, käännä se sitten nopeasti ympäri, paina kansilasia kevyesti, jotta se tarttuu tiukasti vaseliiniin koveran reiän reunassa, ja tarkkaile sitten suuren tehon alla mikroskoopilla (tai tummalla kentällä).
2. Ota ymppäyssilmukalla varustettu bakteerisuspensiorengas ja aseta se puhtaan lasilevyn keskelle paineenpudotusmenetelmällä ja peitä bakteerisuspensio varovasti peitelasilla välttäen ilmakuplien muodostumista ja estämällä bakteerisuspension ylivuodosta. Kirkaskentän (tai pimeyden) havainto tehokkaan objektiivin alla.
3. Kapillaarimenetelmää käytetään pääasiassa anaerobisten bakteerien kinetiikan tutkimiseen. Valitse yleensä 60~70mm pitkä. Kun anaerobinen bakteerisuspensio on sifonoitu kapillaarin läpi, jonka aukko on 0.5-1,0 mm, sulje kapillaarin kaksi päätä liekillä. Kapillaari kiinnitettiin lasilevylle muovipaperilla ja tarkkailtiin tehokkaan linssin alla pimeässä kentässä.
Värjäytyneiden mikrobinäytteiden tarkkailu mikroskoopilla:
Bakteerinäytteen värjäyksen jälkeen bakteerien ja ympäröivän ympäristön välisen terävän värin kontrastin vuoksi bakteerien ja joidenkin erityisrakenteiden morfologiset ominaisuudet (kuten koko, muoto, järjestely jne.) voivat muuttua. bakteerit voidaan luokitella ja tunnistaa värjäytymisreaktiivisuuden mukaan.
(1) Bakteerivärjäyksen yleinen menettely Bakteerivärjäyksen yleinen menettely on: sively (kuivaus) - kiinnitys - värjäys.
1. Smear Veren, eritteiden, eritteiden, pistonesteen ja nesteviljelmän valmistaminen sekä ohutkalvosuovutusten ohjaaminen lasilevyille; ruumiinavaus tai tartunnan saaneet eläinkudokset, voitele leesio vanupuikolla näytteenottoa varten. Kun valmistetaan bakteeripesäkkeitä tai nurmikot kiinteällä alustalla, ota ensin rokotussilmukalla rengas normaalia suolaliuosta ja aseta se objektilasin keskelle. Ota sitten pieni määrä viljelmää steriilillä inokulaatiosilmukalla ja jauha se. tasaisesti normaalissa suolaliuoksessa ja levitä 1cm2 Isoille tai pienille maalatuille pinnoille, anna kuivua luonnollisesti huoneenlämmössä tai kuivua hitaasti etäältä.
2. Kiinnityksen tarkoituksena on tappaa bakteereja, koaguloida bakteeriproteiinia ja rakennetta sekä helpottaa värjäytymistä; edistää bakteerien kiinnittymistä objektilasiin, jotta vesi ei huuhtoudu pois pesun aikana; muuttaa bakteerien läpäisevyyttä väriaineille, mikä on hyödyllistä värjäytyvien bakteerisolujen rakenteelle. Se kiinnitetään yleensä liekillä kuumentamalla, ja kuivattu sively levitetään nopeasti liekin läpi 3 kertaa. On parempi olla polttamatta ihoa käden takaosassa, kun se koskettaa liukumäkiä.
3. Värjäys Valitse värjäykseen eri värjäysmenetelmiä eri tarkastustarkoituksiin. Lisää värjäyksen aikana väriliuosta tipoittain peittävyyden lisäämiseksi.
4. Peittaus Mitä tahansa ainetta, joka voi lisätä väriaineen ja värjätyn esineen välistä affiniteettia, kiinnittää väriaineen värjättyyn esineeseen ja aiheuttaa muutoksen solukalvon läpäisevyydessä, kutsutaan peittausaineeksi. Yleisesti käytettyjä ovat aluna, tanniinihappo, metallisuolat ja jodi jne., ja kuumennusta käytetään myös värjäytymisen edistämiseen. Peittausaineita voidaan käyttää primäärivärjäyksen ja vastavärjäyksen välillä, ja niitä voidaan käyttää myös fiksaation jälkeen tai kiinnitysaineessa ja värjäyksessä.
5. Värinpoisto Mitä tahansa kemiallista ainetta, joka voi poistaa värjätyn esineen värin, kutsutaan värinpoistoaineeksi. Etanolia, asetonia jne. käytetään yleisesti värinpoistoaineina. Värinpoistoaine voi havaita bakteerien ja väriaineiden yhdistelmän stabiilisuusasteen, jota voidaan käyttää differentiaalivärjäykseen.
6. Vastavärjäys Bakteerit tai niiden rakenteet, joista on poistettu väri, vastavärjätään usein vastavärjäysliuoksella tarkkailun helpottamiseksi. Vastavärjäysliuoksen väri eroaa ensisijaisen värjäysliuoksen väristä terävän kontrastin muodostamiseksi. Vastavärjäys ei saa olla liian voimakas, jotta se ei peitä alkuperäisen värjäyksen väriä.
