Mitkä ovat fluoresoivan mikroskoopin erityiset rakenneosat?
Värisuodatinlohko on tärkeä osa fluoresenssimikroskooppia, ja sen ydinkomponentit koostuvat ensimmäisestä viritysvalon estosuodattimesta, toisesta emissiovalon estosuodattimesta ja säteen jakavasta peilistä. Eri valmistajien värisuodatinmallit ja nimet ovat usein epäjohdonmukaisia.
1. Viritysvalosuodatin ja emissiovalosuodatin: Valonlähteen ja fluoresoivan pigmentin ominaisuuksien perusteella valitaan yleensä seuraavat kolme sovitustyyppiä, jotka tuottavat viritysvaloa tietyllä aallonpituusalueella ja sallivat näytteen virittämän fluoresenssin kulkea okulaarin läpi ja saavuttaa kuvantamista varten.
UV-viritys: Viritysvalosuodatin voi päästää UV-valon läpi ja estää yli 400 nm:n näkyvän valon kulkemisen. Vastaava emissiovalosuodatin päästää sinisen valon läpi, ja valo näkyy näkökentässä sinisenä, esimerkiksi kun sitä käytetään DAPI-värjäykseen.
Sinisen valon viritys: Viritysvalosuodatin voi päästää sinisen valon läpi ja estää valon muilta aallonpituuksilta. Vastaava emissiovalosuodatin päästää läpi vihreän valon, kuten GFP-värjäysmerkit.
Vihreän valon viritys: Viritysvalosuodatin päästää vihreän valon läpi ja estää valon muilta aallonpituuksilta. Vastaava emissiovalosuodatin päästää yleensä punaisen valon läpi, kuten rodamiinivärjäyksen.
2. Puoliläpinäkyvä ja puoliksi heijastava värisuodatin: Sen tehtävänä on täysin estää viritysvaloa kulkemasta läpi ja heijastamasta sitä; Ja säteilevät valoa vastaavalla aallonpituusalueella. Sen malli vastaa viritysvalosuodatinta ja emissiovalosuodatinta.
(2) Objektiivilinssi ja okulaari
Erilaisia objektiivilinssejä voidaan käyttää, mutta on parasta valita objektiivit, joissa on lisätty skaala ja kromaattisen poikkeaman vähennys, koska niiden itsefluoresenssi on erittäin alhainen ja valonläpäisykyky (aallonpituusalue) sopii fluoresenssiin. Koska kuvan fluoresenssikirkkaus mikroskoopin kentässä on suoraan verrannollinen objektiivin aukon neliöön ja kääntäen verrannollinen sen suurennukseen, fluoresenssikuvien kirkkauden parantamiseksi tulisi käyttää objektiivilinssiä, jolla on suurempi aukkosuhde. Erityisesti näytteille, joiden fluoresenssi on riittämätön, tulee käyttää objektiivilinssiä, jolla on korkea aukkosuhde ja korkea valonläpäisevyys, ja okulaari, jossa on pienin mahdollinen suurennus.
(3) Muut optiset laitteet
Peilin heijastava kerros on yleensä päällystetty alumiinilla, koska alumiini absorboi vähemmän ultraviolettivaloa ja näkyvää valoa sinisellä violetilla alueella ja heijastaa yli 90 % (kun taas hopean heijastuskyky on vain 70 %). Yleensä käytetään litteitä peilejä. Tarkennuslinssi, joka on erityisesti suunniteltu ja valmistettu fluoresenssimikroskooppeja varten, on valmistettu kvartsilasista tai muusta lasista, joka läpäisee ultraviolettivaloa. Putoavan valon laite, sen lisäksi, että sillä on transmissiivinen valonlähde, soveltuu paremmin läpinäkymättömien ja puoliläpinäkyvien näytteiden, kuten paksujen levyjen, suodatinkalvojen, bakteeripesäkkeiden, kudosviljelmien ja muiden näytteiden, suoraan tarkkailuun. Viime vuosina on kehitetty monia uudentyyppisiä fluoresenssimikroskooppeja käyttämällä putoavan valon laitetta, joka tunnetaan nimellä putoavan valon fluoresenssimikroskooppi.
(4) Valonlähde
Nykyään valonlähteinä käytetään yleisesti korkeapaineisia{0}}50 tai 100 W:n elohopealamppuja. Käytön aikana kahden elektrodin välillä tapahtuu purkausta, jolloin elohopea haihtuu ja pallon sisällä oleva paine kasvaa nopeasti (tämä prosessi kestää yleensä noin 5-15 minuuttia). Tämän prosessin aikana säteilee valokvantteja ja vapautuvan valon aallonpituus riittää virittämään erilaisia fluoresoivia aineita. Siksi sitä käytetään laajalti fluoresenssimikroskoopeissa.
Elohopealamppujen käyttöikä on suhteellisen lyhyt, yleensä 200 tuntia. Vastauksena tähän käyttöiän rajoitukseen on viime vuosina käytetty laajasti uudentyyppistä fluoresoivaa valonlähdettä X-Cite, jonka lampun käyttöikä on erittäin pitkä, 2000 tuntia, ja joustava käyttö - ei esilämmitystä, käyttövalmis.
