Fluoresenssimikroskooppeja on kahta tyyppiä optisen reitin suhteen:
1. Transmissiofluoresenssimikroskooppi: viritysvalolähde on kondensaattoripeilin läpi näytemateriaalin läpi stimuloimaan fluoresenssia. Yleisesti käytetty pimeän kentän keräilijä, voidaan käyttää myös tavallista keräilijää, säädä heijastin siten, että viritysvalo läpäisee ja ohitetaan näytteeseen. Tämä on vanhempi tyyppinen fluoresenssimikroskooppi. Etuna on, että fluoresenssi on vahva pienellä suurennuksella, ja haittana on, että fluoresenssi heikkenee suurennuksen kasvaessa. Joten on parempi tarkkailla suurempaa näytemateriaalia.
2. Putoavan tyypin fluoresenssimikroskooppi tämä on viime aikoina kehitetty uudenlainen fluoresenssimikroskooppi, jonka erona on se, että valon viritys objektiivilinssistä alas näytteen pintaan, eli sama objektiivilinssi kuin keskittimen valaistus ja fluoresenssiobjektiivin kokoelma. Optinen polku on lisättävä kaksiväriseen säteen erottimeen, joka on 45. kulmassa valon uraanin kanssa, viritysvalo heijastuu objektiivin linssiin ja kerätään näytteeseen, näytteen tuottama fluoresenssi ja objektiivi linssin linssin pinta, peitelasipinnan herätevalon heijastus objektiivilinssiin samanaikaisesti ja takaisin kaksiväriseen säteen erottimeen niin, että viritysvalo ja fluoresenssi erotetaan jäännösviritysvalosta ja absorboidaan sitten estävät suodattimet. Jos vaihdat eri virityssuodattimen / kaksivärisen säteen erottimen / estävän suodattimen yhdistelmälohkon, se voi täyttää erilaisten fluoresenssireaktiotuotteiden tarpeet. Tämän fluoresenssimikroskoopin etuna on tasaisen valaistuksen näkökenttä, selkeä kuva, mitä suurempi fluoresenssin suurennus, sitä vahvempi.
(B) fluoresenssimikroskooppimenetelmä.
1. Avaa valonlähde, ultrakorkeapaineinen elohopealamppu, esilämmitä muutaman minuutin ajan kirkkaimman pisteen saavuttamiseksi.
2. Transmissiofluoresenssimikroskooppi on asennettava valonlähteen ja suodattimen stimuloimiseen tarvittavan keskittimen väliin objektiivin takaosaan vastaavan estosuodattimen kanssa. Putoava fluoresenssimikroskooppi on asetettava tarvittavan virityssuodattimen / kaksivärisen säteen erottimen / estosuodatinosien optisen reitin aukkoon.
3. Tarkkaile pienellä suurennuksella ja säädä valonlähteen keskikohta niin, että se sijaitsee koko valaistuspisteen keskellä eri mallien fluoresenssimikroskooppien säätölaitteen mukaan.
4. Aseta näyteviipale, jotta tarkennus voidaan havaita. Käytössä tulee kiinnittää huomiota: suodattimien asennuksen lopussa älä käytä silmää tarkkaillaksesi suoraan, jotta se ei aiheuta silmävaurioita; öljypeilin kanssa näytteen tarkkailemiseksi sinun on käytettävä erityistä ei-fluoresoivaa öljypeiliä; korkeapaineelohopealamppua ei voi avata uudelleen heti lampun sulkemisen jälkeen, sinun on oltava 5 minuuttia ennen kuin voit aloittaa uudelleen, muuten se on epävakaa, mikä vaikuttaa elohopealamppujen käyttöikään.
(C) Havainto Fluoresenssimikroskoopilla opetusvaiheessa sinivioletin valosuodattimen avulla voidaan nähdä solut, jotka on värjätty 0,01 % amidiinioranssilla fluoresoivalla väriaineella, ja solujen tuma ja sytoplasma viritetään tuottamaan kaksi erilaista fluoresenssin värit (tummanvihreä ja oranssinpunainen).
