Fluoresenssimikroskooppeja on kahdenlaisia niiden valopolun perusteella:
1. Transmissiofluoresenssimikroskooppi: Viritysvalonlähdettä käytetään virittämään fluoresenssi ohjaamalla näytemateriaali kondensaattorilinssin läpi. Myös yleisesti käytettyjä tummakenttäkeskittimiä voidaan käyttää ja tavallisia keskittimiä voidaan käyttää heijastimen säätämiseen ohjaamaan ja sivukeilaan herätevalo näytteeseen. Tämä on suhteellisen vanhanaikainen fluoresenssimikroskooppi. Sen etuna on voimakas fluoresenssi pienellä suurennuksella, mutta sen haittana on, että sen fluoresenssi heikkenee suurennoksen kasvaessa. Siksi se on parempi tarkastella suurempia näytemateriaaleja.
2. Putoavan valon fluoresenssimikroskooppi on uudenlainen nykyaikana kehitetty fluoresenssimikroskooppi. Toisin kuin yllä, viritysvalo putoaa objektiivilinssistä alaspäin näytteen pinnalle käyttämällä samaa objektiivilinssiä kuin valaistuskondensaattori ja objektiivilinssi fluoresenssin keräämiseen. Optiselle tielle, joka on 45 asteen päässä kevyestä uraanista, on lisättävä kaksivärisen säteen jakaja. Kulma, viritysvalo heijastuu objektiiviin ja keskittyy näytteeseen. Näytteen tuottama fluoresenssi sekä objektiivin ja suojalasin pinnalta heijastuva viritysvalo menevät objektiivin linssiin ja palaavat kaksoisvärisäteen jakajaan erottaen viritysvalon ja fluoresenssin. Jäljellä oleva viritysvalo absorboituu sitten estosuodattimeen. Jos käytetään erilaisia virityssuodattimien/kaksoisvärisäteen erottimien/sulkusuodattimien yhdistelmiä, ne voivat täyttää erilaisten fluoresoivien reaktiotuotteiden tarpeet. Tämän fluoresenssimikroskoopin etuja ovat tasainen kentän valaistus, selkeä kuva ja vahvempi fluoresenssi suuremmalla suurennuksella.
Ohjeet fluoresenssimikroskoopin käyttöön
1. Kytke valonlähde päälle. Ultrakorkeapaineista elohopealamppua on esilämmitettävä muutaman minuutin ajan maksimikirkkauden saavuttamiseksi.
2. Transmissiofluoresenssimikroskopia edellyttää tarvittavan virityssuodattimen asentamista lampun lähteen ja kondensaattorin väliin sekä vastaavan estosuodattimen asentamista objektiivin taakse. Putoavan valon fluoresenssimikroskoopin on asetettava tarvittava virityssuodatin/kaksoisvärisäteen jakaja/estävä suodatinlohko optisen polun aukkoon.
3. Tarkkaile pienitehoisella mikroskoopilla ja säädä valonlähteen keskikohta erityyppisten fluoresenssimikroskooppien säätölaitteen mukaan siten, että se sijaitsee koko valaistuspisteen keskellä.
4. Aseta näyte ja tarkenna se tarkkailua varten. Huomio on kiinnitettävä käytön aikana: Älä tarkkaile suoraan silmilläsi ennen suodattimen asentamista silmävaurioiden välttämiseksi; Kun näytteitä tarkastellaan öljymikroskoopilla, on käytettävä erityistä ei-fluoresoivaa öljymikroskooppia; Kun korkeapaineelohopealamppu on sammutettu, sitä ei voi heti sytyttää uudelleen. Uudelleenkäynnistys kestää 5 minuuttia, muuten se on epävakaa ja vaikuttaa elohopealampun käyttöikään.
(3) Tarkasteltaessa fluoresenssimikroskoopilla opetusalustalla käyttäen siniviolettivalosuodatinta, voidaan nähdä solut, jotka on värjätty 0,01 % akridiinioranssilla fluoresoivalla väriaineella. Ydin ja sytoplasma kiihtyvät tuottamaan kaksi erilaista fluoresenssiväriä (tummanvihreä ja oranssinpunainen).
