Fluoresenssimikroskooppien periaatteet ja rakenteelliset ominaisuudet
Fluoresenssimikroskooppi käyttää erittäin tehokasta pistevalolähdettä, joka lähettää tietyn aallonpituuden valoa (kuten ultraviolettivaloa 3650 tai purppuransinistä valoa 4200) värisuodatinjärjestelmän läpi viritysvalona, joka virittää näytteessä olevat fluoresoivat aineet lähettämään eri värejä fluoresenssia, ja sitten tarkkailee objektiivin linssin ja okulaarin suurennuksen kautta. Tällä tavalla se on helppo tunnistaa ja herkkyys on korkea, vaikka fluoresenssi on heikko vahvalla taustalla. Sitä käytetään pääasiassa solurakenteen, toiminnan ja kemiallisen koostumuksen tutkimiseen. Fluoresenssimikroskoopin perusrakenne koostuu tavallisesta optisesta mikroskoopista ja joistakin lisävarusteista, kuten fluoresoivasta valonlähteestä, virityssuodattimesta, kaksoisvärisäteen jakajasta ja estosuodattimesta. Fluoresoiva valonlähde - käyttää yleensä ultra-korkeapaineisia elohopealamppuja (50-200 W), jotka voivat lähettää valoa eri aallonpituuksilla, mutta jokaisella fluoresoivalla aineella on viritysvalon aallonpituus, joka tuottaa voimakkaimman fluoresenssin. Siksi virityssuodattimia (yleensä ultravioletti-, purppura-, sininen ja vihreä virityssuodattimet) on lisättävä, jotta vain tietyn aallonpituuden viritysvalo pääsee kulkemaan läpi ja säteilyttää näytteen samalla, kun se absorboi kaiken muun valon. Viritysvalolla säteilytyksen jälkeen jokainen aine emittoi näkyvää fluoresenssia, jonka aallonpituus on suurempi kuin säteilytyksen aallonpituus hyvin lyhyessä ajassa. Fluoresenssi on spesifistä ja yleensä heikompaa kuin viritysvalo. Tietyn fluoresenssin havaitsemiseksi objektiivin taakse on lisättävä estävä (tai vaimentava) suodatin.
Sen tehtävät ovat kaksijakoiset: ensinnäkin absorboida ja estää viritysvaloa pääsemästä okulaariin, jotta vältetään häiritsevä fluoresenssi ja silmien vahingoittaminen; toiseksi valitaan ja sallitaan spesifisen fluoresenssin läpäiseminen osoittaen tiettyä fluoresoivaa väriä. Kahden tyyppisiä suodattimia on käytettävä yhdessä.
