Ero laserkonfokaalimikroskoopin ja perinteisen optisen mikroskoopin välillä
Laserpyyhkäisykonfokaalinen fluoresenssimikroskopia on suhteellisen edistynyt molekyyli- ja solubiologian analyysilaite, joka käyttää tietokone-, laser- ja kuvankäsittelytekniikkaa kolmiulotteisen datan saamiseksi biologisista näytteistä. Sitä käytetään pääasiassa elävien solujen rakenteen ja tiettyjen molekyylien ja ionien biologisten muutosten tarkkailuun, kvantitatiiviseen analyysiin ja reaaliaikaiseen kvantitatiiviseen määritykseen.
Laserkonfokaalimikroskopian periaate: käytä valonlähteen taakse sijoitettua valaistusneulanreikää ja anturin eteen sijoitettua tunnistusreikää pistevalaistuksen ja pisteen havaitsemisen toteuttamiseen. Valonlähteestä valonreiän kautta säteilevä valo kohdistetaan näytteen polttotasossa olevaan pisteeseen, ja tästä pisteestä emittoitu fluoresenssi kuvataan tunnistusreikään, ja kaikki tämän pisteen ulkopuolella emittoitunut valo estetään ilmaisulla. neulanreikä. Valaistuksen neulanreikä ja tunnistusneulanreikä on konjugoitu säteilytettyyn pisteeseen tai havaittuun pisteeseen, joten havaittu piste on konfokaalipiste ja taso, jolla havaittu piste sijaitsee, on konfokaalitaso.
Tietokone näyttää havaitut pisteet tietokoneen näytöllä kuvapisteinä. Täydellisen kuvan muodostamiseksi optisella polulla oleva skannausjärjestelmä skannaa näytteen polttotasoa täydellisen konfokaalisen kuvan luomiseksi. Niin kauan kuin lava liikkuu ylös ja alas Z-akselia pitkin, uusi näytteen kerros siirretään konfokaalitasolle ja näytteen uusi kerros kuvataan monitorille. Z-akselin jatkuvalla liikkeellä voidaan saada jatkuvia kuvia näytteen eri kerroksista. Kevyesti leikattu kuva.
Ero perinteisten valomikroskooppien välillä
Perinteisissä fluoresenssimikroskoopeissa on ylitsepääsemätön puute: polttotason ulkopuolella olevat fluoresoivat rakenteet ovat epäselviä ja epäselviä. Syynä on se, että useimmilla biologisilla näytteillä on päällekkäisiä rakenteita. Jos fluoresoivasti leimatut rakenteet jakautuvat eri tasoille ja menevät päällekkäin, myös objektiivi ottaa vastaan hajaantuneen fluoresenssin polttotason ylä- tai alapuolelta, ja fluoresenssimikroskoopin resoluutio paranee huomattavasti. vähentää.
Perinteisten optisten mikroskooppien perusteella laserpyyhkäisevät konfokaaliset mikroskoopit käyttävät laservaloa valonlähteenä, ottavat käyttöön konjugaattitarkennusperiaatteen ja -laitteen sekä käyttävät tietokoneita digitaalisen kuvankäsittelyn, havainnoinnin, analyysin ja havaittujen kohteiden tulostamiseen. Näyte voidaan skannata tomografisesti ja kuvata solujen kolmiulotteisen spatiaalisen rakenteen tuhoamatonta tarkkailua ja analysointia varten. Samaan aikaan käyttämällä immunofluoresoivaa leimausta ja ionifluoresoivaa leimauskoettimia tämä tekniikka ei voi vain tarkkailla kiinteitä soluja ja kudosleikkeitä, vaan myös suorittaa reaaliaikaista dynaamista tarkkailua ja havaita elävien solujen rakennetta, molekyylejä, ioneja ja elämäntoimintoja, subsellulaarisella tasolla Fysiologisten signaalien, kuten Ca2 plus, pH-arvon, kalvopotentiaalin ja solumorfologian muutosten tarkkailusta on tullut uuden sukupolven tehokkaita tutkimustyökaluja morfologian, molekyylisolubiologian, neurotieteen, farmakologian ja genetiikan aloilla.
