Värjäystekniikat ja mikro-organismien mikroskooppinen havainnointi
1. Tarkoitus
1.1 Opi mikrobisivelyjen ja värjäyksen perustekniikat.
1.2 Hallitse yksinkertainen bakteerien värjäysmenetelmä.
1.3 Ymmärtää alustavasti bakteerien morfologiset ominaisuudet ja lujittaa tietoa öljylinssien käytöstä ja aseptisista käyttötekniikoista.
2 Periaatteet
Bakteerien siveleminen ja värjäys on perustekniikka mikrobiologisissa kokeissa. Bakteerisolut ovat pieniä ja läpinäkyviä, minkä vuoksi niitä on vaikea tunnistaa tavallisella valomikroskoopilla. niiden täytyy olla tahraisia. Bakteerien värjäykseen käytetään yhtä väriainetta, jolloin värjäytyneet bakteerit muodostavat selkeän värieron taustasta, jolloin niiden morfologia ja rakenne voidaan havaita selvemmin. Tämä menetelmä on helppokäyttöinen ja soveltuu bakteerisolujen yleisen muodon ja bakteerien järjestyksen tarkkailuun. Perusvärejä käytetään yleisesti yksinkertaisessa värjäyksessä. Tämä johtuu siitä, että neutraaleissa, emäksissä tai heikosti happamissa liuoksissa bakteerisolut ovat yleensä negatiivisesti varautuneita, ja kun emäksiset väriaineet ionisoidaan, niiden molekyylien värjäysosa on positiivisesti varautunut, joten ne ovat emäksisiä. Väriaineen värjäysosa yhdistyy helposti bakteerien kanssa värjäämään niitä. Värjäytyneet bakteerisolut eroavat jyrkästi taustasta, mikä tekee niistä helpompia tunnistaa mikroskoopilla. Yksinkertaisessa värjäyksessä yleisesti käytettyjä väriaineita ovat metyleenisininen, kristallivioletti, emäksinen fuksiini jne. Kun bakteerit hajottavat sokereita ja tuottavat happoa, jolloin viljelyalustan pH laskee, bakteerien positiivinen varaus kasvaa. Tällä hetkellä värjäykseen voidaan käyttää happamia väriaineita, kuten eosiinia, hapan fuksiinia tai kongopunaista. Bakteerit on kiinnitettävä ennen värjäystä. Sillä on kaksi tarkoitusta: toinen on tappaa bakteereja ja saada ne tarttumaan lasilevyyn; toinen on lisätä niiden affiniteettia väriaineisiin. Kaksi yleisesti käytettyä menetelmää ovat lämmitys ja kemiallinen kiinnitys. Kun kiinnität, yritä säilyttää solujen alkuperäinen muoto.
3 materiaalia
3.1 Bakteerit: Bacillus subtilis 12-18h ravinneagar-vinoviljelmä, Staphylococcus aureus 24h -ravinneagar-vinoviljelmä, Escherichia coli 24h-ravinneagar-vinoviljelmä, leipomohiiva-agar-vinoviljelmä.
3.2 Värjäysaine: Lu:n alkalinen metyleenisininen väriaine (tai ammoniumoksalaattikristalliviolettiväri), karbolihappofuksiiniväri.
3.3 Instrumentit tai muut välineet: mikroskooppi, alkoholilamppu, objektilasi, rokotussilmukka, objektilasiteline, kaksikerroksinen pullo (sisältää setriöljyä ja ksyleeniä), linssipaperi, fysiologinen suolaliuos tai tislattu vesi jne.
4. Prosessi: sively → kuivaus → kiinnitys → värjäys → pesu → kuivaus → mikroskooppinen tutkimus.
5 askelta
5.1 Levitä: Ota kaksi puhdasta ja öljytöntä lasilevyä. Laita steriileissä olosuhteissa pieni pisara normaalia suolaliuosta (tai tislattua vettä) jokaiseen lasilevyn keskelle. Käytä inokulaatiosilmukkaa Bacillus subtilis -bakteerin bakteerien sterilointiin. , Micrococcus luteus ja Escherichia coli, poimi hieman bakteerinurmikkoa vinossa olevista vesipisaroista, sekoita hyvin ja levitä ohueksi kalvoksi. Jos käytät bakteerisuspensio- (tai nesteviljelmä) sivelyä, voit käyttää inokulointisilmukkaa poimiaksesi 2–3 silmukkaa ja levittääksesi ne suoraan objektilasille. Varo tiputtamasta liikaa fysiologista suolaliuosta (tislattua vettä) ja poista bakteerit ja levitä sitä tasaisesti eikä liian paksusti.
5.2 Kuivaus Kuivaa luonnollisesti huoneenlämmössä. Voit myös lämmittää sitä hieman alkoholilampun päällä päällystetty puoli ylöspäin kuivataksesi sen. Älä kuitenkaan mene liian lähelle liekkiä, sillä liian korkea lämpötila tuhoaa bakteerien morfologian.
5.3 Kiinnitys Jos käytetään lämmitettyä kuivausta, kiinnitys ja kuivaus yhdistetään yhdeksi vaiheeksi ja menetelmä on sama kuin kuivaus. Levitä, kuivaa ja lämpökiinnitä.
5.4 Värjäys: Aseta objektilasi tasaisesti objektilasitelineelle ja lisää 1-2 tippaa väriliuosta sivelyliuokseen (väriliuoksen on sopivaa peittää vain sivelykalvo). Värjää Lu:n emäksisellä metyleenisinisellä 1-2 minuuttia ja värjää karbolihappofuksiinilla (tai ammoniumoksalaattikristallivioleilla) noin 1 minuutin ajan.
5.5 Pesu vedellä: Kaada väriliuos pois ja huuhtele varovasti vesijohtovedellä objektilasin toisesta päästä, kunnes sivelyvesi on väritöntä. Kun peset vedellä, älä pese pinnoitettua pintaa suoraan vedellä. Veden virtaus ei saa olla liian nopea tai suuri, jotta kalvo ei putoa.
5.6 Kuivaus: Ravista vesipisarat liukulevyltä ja kuivaa luonnollisesti, föönaa hiustenkuivaajalla tai ime imupaperilla (varo pyyhkimästä bakteereja pois). 5.7 Mikroskooppitutkimus Suorita mikroskooppinen tutkimus, kun sively on kuivunut. Pinnoitteen on oltava täysin kuiva ennen kuin sitä tarkastellaan öljylinssillä.
6 Tulokset Piirrä yhden värjäyksen jälkeen havaittujen E. colin ja Micrococcus luteuksen morfologia.
