Värjäystekniikat ja mikro-organismien mikroskooppinen havainnointi
Yksinkertainen bakteerien värjäys
1 Tavoitteet
1.1 Opi mikrobisivelyn ja värjäyksen perustekniikat.
1.2 Hallita bakteerien yksinkertainen värjäysmenetelmä.
1.3 Tutustua bakteerien morfologisiin ominaisuuksiin ja lujittaa öljypeilin käytön ja aseptisten toimintatekniikoiden oppimista.
2 Periaate Bakteerien sively ja värjäys on perustekniikka mikrobiologisissa kokeissa. Bakteerisolut ovat pieniä ja läpinäkyviä, niitä ei ole helppo tunnistaa tavallisella valomikroskoopilla ja ne on värjättävä. Yhden väriaineen käyttö bakteerien värjäämiseen, jotta värjäytyvä organismi ja tausta muodostavat selkeän värieron, jotta niiden morfologia ja rakenne voidaan havaita selkeämmin. Tämä menetelmä on helppo suorittaa ja soveltuu organismin yleisen muodon ja bakteerien järjestyksen tarkkailuun. Alkalisia värejä käytetään yleisesti yksinkertaisessa värjäyksessä, koska neutraaleissa, emäksissä tai heikosti happamissa liuoksissa bakteerisolut ovat yleensä negatiivisesti varautuneita, ja kun alkaliset väriaineet ionisoidaan, niiden molekyylien värjäysosa on positiivisesti varautunut, joten alkalisten värien värjäysosa. voivat helposti sitoutua bakteereihin saadakseen bakteerit värillisiksi. Värjäytyneet bakteerisolut eroavat jyrkästi taustasta ja ne on helpompi tunnistaa mikroskoopin alla. Yleisesti käytettyjä väriaineita yksinkertaiseen värjäykseen ovat merosyaniinisininen, kristallivioletti ja emäksinen yhdiste punainen. Kun sokerin bakteerien hajoaminen tuottaa happoa niin, että alustan pH laskee, bakteerien positiivinen varaus kasvaa, ja sitten sitä voidaan käyttää punaisen, hapan punaisen tai Kongon punaisen ja muiden happamien väriaineiden värjäykseen. Bakteerit on kiinnitettävä ennen värjäystä. Sen tarkoitus on kaksiosainen: toinen on tappaa bakteerit ja saada bakteerit tarttumaan objektilasiin; toinen on lisätä sen affiniteettia väriaineeseen. Yleensä käytetään kahta menetelmää: lämmitys ja kemiallinen kiinnitys. Yritä säilyttää solujen alkuperäinen morfologia kiinnittäessäsi.
3 Materiaalit
3.1 Kanta Bacillus subtilis 12-18h ravinneagar-vinoviljelmä, Staphylococcus aureus noin 24h ravinneagar-vinoviljelmä, Escherichia coli 24h-ravinneagar-vinoviljelmä, leipomohiiva-agar-vinoviljelmä.
3.2 Värjäys Lue:n alkalinen metyleenisininen petsi (tai ammoniumoksalaattikristalliviolettiväri), karbolihappoyhdistepunaväri.
3.3 Instrumentit tai muut varusteet Mikroskooppi, alkoholilamppu, objektilasi, rokotusrengas, objektilasien pidike, kaksikerroksinen pullo (täytetty setriöljyllä ja ksyleenillä), mikroskooppipaperi, fysiologinen suolaliuos tai tislattu vesi jne.
4 Toimenpide Levitys → kuivaus → kiinnitys → värjäys → pesu → kuivaus → mikroskooppinen tutkimus.
5 askelta
5.1 sively Ota kaksi puhdasta ja öljytöntä objektilasia, joista kummassakin on pieni pisara suolaliuosta (tai tislattua vettä) objektilasin keskelle aseptisissa olosuhteissa ja joissa on rokotusrengas aseptista käyttöä varten Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus -bakteerista. ja Escherichia coli vino poimia vähän sammalta vesipisarassa, sekoitetaan ja päällystetään kalvolla. Jos bakteerisuspensiota (tai nestemäistä viljelmää) sivelee, sitä voidaan käyttää renkaan inokulointiin, valitse 2-3 rengasta suoraan objektilasille. Huomaa, että suolaliuosta (tislattua vettä) ja ottaa bakteerit eivät saa olla liikaa ja levitä tasaisesti, ei liian paksu.
5.2 Kuivaus Kuivaa luonnollisesti huoneenlämmössä. Se voidaan myös kuivata kuumentamalla hieman alkoholilampun yläpuolelle päällystetty puoli ylöspäin. Älä kuitenkaan mene liian lähelle liekkiä, koska liian korkea lämpötila tuhoaa bakteerien morfologian.
5.3 Kiinnitys Jos käytetään lämpökuivausta, kiinnitys ja kuivaus yhdistetään yhdeksi vaiheeksi samalla tavalla kuin kuivaus. Levitä, kuivaa ja lämpökiinnitä.
5.4 Värjäys Aseta objektilasi tasaisesti objektilasihyllylle, lisää 1-2 tippaa värjäysliuosta sivelyliuokseen (värjäysliuos vain peittää sivelykalvon). Väritä sively Lü's Basic Mellanox Bluella 1-2 minuutin ajan ja karbonaattipunaisella (tai ammoniumoksalaattikristallivioletilla) noin 1 minuutin ajan.
5.5 Huuhtelu Kaada värjäysliuos pois ja huuhtele varovasti vesijohtovedellä objektilasin toisesta päästä, kunnes sivelystä alas valuva vesi on väritöntä. Huuhtelun aikana älä anna veden valua suoraan pinnoitetun pinnan pesuun. Veden virtaus ei saa olla liian nopeaa tai liian suurta, jotta sivelykalvo ei irtoa.
5.6 Kuivaus Ravista vesipisarat pois objektilasilta kuivuaksesi luonnollisesti, kuivaamiseen voidaan käyttää föönausta tai imukykyistä paperia (varo pyyhkimästä pois bakteerirunkoa). 5.7 Mikroskooppinen tutkimus Sieppa kuivataan ja tutkitaan mikroskoopilla. Suihkeen on oltava täysin kuiva, ennen kuin sitä voidaan tarkastella öljymikroskoopilla.
6 Tulokset Piirrä E. colin ja Micrococcus garciniaen morfologia yhden värjäyksen jälkeen.
Gram Stain
1 Tarkoitus
1.1 Ymmärtää Gram-värjäyksen periaate ja merkitys bakteerien luokittelussa ja tunnistamisessa.
1.2 Oppia ja hallita Gram-värjäystekniikkaa ja lujittaa valomikroskoopin öljylinssin käytön oppimista.
