Fluoresenssimikroskoopin käyttötaidot ja menetelmät
Fluoresenssimikroskoopin tekniset parametrit 1. Laajakulmainen okulaari 2. Akromaattinen objektiivi 3. Nelireikäinen objektiivimuunnin 4. Emittoiva fluoresenssilaite sininen (b) vihreä (g) viritysjärjestelmä 100W elohopealamppu 5. Koaksiaalinen karkea mikrotarkennusmekanismi: tarkennusalue 15 mm, mikroruudukon arvo 0,002 mm 6. Kaksikerroksisen mekaanisen työpöydän pituussuuntainen liikealue: 70 mm, sivuttaisliikealue: 50 mm.
Fluoresenssimikroskoopin käyttötaidot ja menetelmät
(1) lasilevyt
Luistin paksuuden tulee olla välillä 0.8-1,2–1,2 mm. Liian paksu objektilasi ei toisaalta absorboi paljon valoa, eikä toisaalta saa viritysvaloa kerääntymään näytteeseen. Objektiivin on oltava sileä, tasapaksuinen ja vailla ilmeistä spontaania fluoresenssia. Shi Ying -lasiliukumäkiä tarvitaan joskus.
(2) Peitelasi
Peitelasi on noin 0,17 mm paksu ja sileä. Viritysvalon tehostamiseksi voidaan käyttää myös häiriöpeitelasia, joka on eräänlainen erityinen peitelasi, jossa on useita ainekerroksia (kuten magnesiumfluoridia), joilla on erilaisia häiriövaikutuksia eri valon aallonpituuksilla. Se voi saada fluoresenssin kulkemaan sujuvasti ja heijastamaan viritysvaloa, ja tämä heijastunut viritysvalo voi virittää näytettä.
(3) Näytteet
Kudosleikkeet tai muut näytteet eivät saa olla liian paksuja. Jos se on liian paksu, suurin osa viritysvalosta kuluu näytteen alaosassa, kun taas objektiivin linssin suoraan havaitsema yläosa ei ole täysin virittynyt. Lisäksi solujen päällekkäisyys tai epäpuhtauksien peittäminen vaikuttaa harkintaan.
(4) tiivistysaine
Tiivisteaineena käytetään yleisesti glyserolia, jonka tulee olla väritöntä ja läpinäkyvää ilman spontaania fluoresenssia. Fluoresenssin kirkkaus on kirkas pH:ssa 8,5 ~ 9,5, eikä se ole helppo haalistua nopeasti. Siksi tiivistysaineena käytetään usein vastaavaa seosta, jossa on glyserolia ja 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 karbonaattipuskuria.
(5) peiliöljy
Yleensä peiliöljyä on käytettävä tarkasteltaessa näytteitä tummakentän fluoresenssimikroskoopilla ja öljypeilillä. On parasta käyttää erityistä ei-fluoresoivaa peiliöljyä tai sen sijaan voidaan käyttää yllä olevaa glyseriiniä. Myös nestemäistä parafiinia voidaan käyttää, mutta taitekerroin on alhainen, mikä vaikuttaa hieman kuvanlaatuun.
