Useita huomautuksia ja vinkkejä vaihekontrastimikroskoopin käyttöön
Vaihekontrastimikroskoopin käyttö
1) Asenna vaihekontrastilaite: irrota tavallisen mikroskoopin kondensaattorilinssi ja asenna kondensaattorilinssi, jossa on rengasmainen kalvo, sopivaan mikroskooppiin; poista mikroskoopin tavallinen objektiivilinssi ja vaihda se objektiivilinssiin, jossa on vaihelevy; vaihda okulaari Focusing okulaareilla vaihekontrastimikroskooppeja varten; erityiset vihreät suodattimet (joskus eivät välttämättömät) sijoitetaan valonlähteen valon sisääntuloon.
2) Valon kohdistus ja tarkennus: Säädä tarkennusokulaaria ja paksuuden säätöruuvia, kunnes valkoinen ympyrä ja musta ympyrä näkyvät selvästi näkökentässä. Musta ympyrä on kiinteä, ja valkoista ympyrää voidaan siirtää säätämällä lauhdutinlaitteen ruuvia siten, että musta ympyrä ja valkoinen ympyrä osuvat täysin yhteen. Irrota tarkennusokulaari ja vaihda se mikroskoopin alkuperäiseen okulaariin tarkistaaksesi.
Faasikontrastimikroskoopin käytön ongelmien analyysi
1. Näytteen paksuuden vaikutus Vaihekontrastihavainnointia suoritettaessa näytteen paksuuden tulee olla 5 μm tai ohuempi. Paksumpaa näytettä käytettäessä näytteen ylempi kerros on hyvin kirkas, mutta syvä kerros hämärtyy ja aiheuttaa vaihesiirtohäiriöitä. ja valon sironta.
2. Peitelasin ja liukulasin vaikutus Näyte tulee peittää peitelasilla, muuten rengasmaisen kalvon kirkas rengas ja vaihelevyn tumma rengas ovat vaikeasti limittyviä. Vaihekontrastihavainnolla on korkeat vaatimukset myös liukulasien ja peitelasien lasin laadulle. Kun on naarmuja, epätasainen paksuus tai epätasaisuus, esiintyy kirkasta rengasvääristymää ja vaihehäiriöitä. Lisäksi, kun luisti on liian paksu tai liian ohut, rengasmaisen kalvon kirkas rengas kasvaa tai pienenee.
3. Halo- ja häipymisefekti Vaihekontrastimikroskoopin kuvantamisprosessissa, kun tietty rakenne tummenee vaiheviiveen vuoksi, kyseessä ei ole valon häviäminen, vaan valon uudelleenjakautuminen kuvatasolla. Joten valo, joka ilmeisesti katoaa tummilla alueilla, näkyy kirkkaana halona tummempien kohteiden ympärillä. Tämä on faasikontrastimikroskopian haitta, joka estää hienorakenteiden havainnoinnin ja haloilmiö on vakavampi, kun rengasmainen kalvo on hyvin kapea. Toinen ilmiö vaihekontrastimikroskopiassa on varjostusvaikutus, joka viittaa kontrastin häviämiseen suuremman alueen reunoilla samalla vaiheviiveellä, kun sitä tarkastellaan vaihekontrastilla.
4. Vaiheen käännös Kun n'n, kuvan vaalea ja tumma kontrasti on juuri päinvastainen, jota kutsutaan vaiheinversioksi. On mahdotonta tunnistaa, kun vaihe-ero δ=0 ja kontrasti kasvaa δ:n kasvaessa, ja vaiheinversio ilmestyy, kun δ jatkaa kasvamistaan tiettyyn arvoon. Käytettäessä 90 prosenttia korkean absorbanssiarvon (suuri kontrasti) objektiivilinssiä tämä muunnosarvo on noin 0,55 λ, ja käytettäessä 70 prosentin vakioabsorbanssiarvoista objektiivilinssiä, se on noin 0,33 λ . Tavoitteita, joilla on korkeammat absorbanssiarvot, tulisi käyttää pienempien optisten reittien erojen ratkaisemiseen.
