Biologisten näytteiden valmistelu ja tarkkailu elektronimikroskooppeja varten
Mikroskoopin resoluutio riippuu käytetyn valon aallonpituudesta. Vuonna 1933 ilmestynyt elektronimikroskooppi saavutti huomattavasti korkeamman resoluution kuin optinen mikroskooppi, koska valonlähteenä käytettiin elektronisäteitä, joiden aallonpituudet ovat paljon näkyvää valoa lyhyempiä. Eri valonlähteet määrittävät myös joukon eroja elektronimikroskooppien ja optisten mikroskooppien välillä.
Elektronisuihkukuvauksen periaatteiden erojen ja näytteiden vaikutustapojen perusteella nykyaikaisista elektronimikroskopeista on kehittynyt monenlaisia. Tällä hetkellä yleisimmin käytettyjä ovat transmissioelektronimikroskoopit ja pyyhkäisyelektronimikroskoopit. Ensimmäisen kokonaissuurennus voi vaihdella välillä 1000-10000000 kertaa, kun taas jälkimmäisen kokonaissuurennus voi vaihdella välillä 20-300000 kertaa. Tämä koe esittelee pääasiassa kahden tyyppisten mikroskooppinäytteiden, transmissioelektronimikroskoopin ja pyyhkäisyelektronimikroskoopin, valmistuksen.
2, laitteet
1. Escherichia coli -kanta on taipuvainen.
2. Liuos tai reagenssi: pentyyliasetaatti, väkevä rikkihappo, vedetön etanoli, steriili vesi, 2-prosenttinen natriumfosfotungstaatin (pH 6,5-8,0) vesiliuos, 0,3-prosenttinen polyvinyyliformaldehydi (liuotettu kloroformiin) liuos, sytokromi-2-asetaatti c.,2-ammonium-2.BR.
3. Instrumentteja tai muita työkaluja ovat tavalliset optiset mikroskoopit, kupariverkot, posliinisuppilot, dekantterilasit, petrimaljat, steriilit tiputtimet, steriilit pinsetit, neulat, lasilevyt, laskentalevyt, tyhjiöpäällystyskoneet, kriittisten pisteiden kuivaimet jne.
3, Käyttövaiheet
(1) Näytteiden valmistelu ja tarkkailu transmissioelektronimikroskooppia varten
1. Metalliverkon käsittely
Optisen mikroskoopin näyte asetetaan lasilevylle tarkkailua varten. Kuitenkin transmissiopeilissä, koska elektronit eivät pääse tunkeutumaan lasilevyn läpi, verkkomateriaalia voidaan käyttää vain kantoaineena, jota kutsutaan yleisesti kantajaverkoksi. Kantoverkko voidaan jakaa eri spesifikaatioihin eri materiaalien ja muotojen vuoksi, joista yleisesti käytetään kupariverkkoa, jonka silmäkoko on 200-400 (reikien määrä). Kupariverkko tulee käsitellä ennen käyttöä lian poistamiseksi ja sen pitämiseksi puhtaana, muuten se vaikuttaa tukikalvon laatuun ja näytekuvien selkeyteen. Tässä kokeessa käytetty 400 meshin kupariverkko voidaan käsitellä seuraavalla menetelmällä: ensin liota ja vaahdota pentyyliasetaatilla muutaman tunnin ajan, huuhtele sitten useita kertoja tislatulla vedellä ja lopuksi upota ja vaahdota kupariverkko vedettömässä etanolissa kuivaamista varten. Jos kupariverkko ei ole vieläkään puhdas yllä olevien menetelmien jälkeen, sitä voidaan liottaa laimennetussa väkevässä rikkihapossa (1:1) 1-2 minuuttia tai keittää 1-prosenttisessa NaOH-liuoksessa muutaman minuutin ajan, huuhdella useita kertoja tislatulla vedellä ja kuivata sitten vedettömässä etanolissa myöhempää käyttöä varten.
