PH-mittari - Väliaineen pH:n määritys ja säätö
Kaikkiin mikro-organismeihin vaikuttaa sen ympäristön pH, jossa ne elävät. Usein valikoivien lajien läsnäolo kaventaa pH-aluetta, jolla ne kasvavat. Joskus alustan happamuus tai emäksisyys voi toimia myös kasvun valintatekijänä. Biokemiallisissa koeelatusaineissa pH-alue, jolla mikro-organismit osoittavat tk-aktiivisuutta substraatissa, on kuitenkin kapeampi kuin kasvun edellyttämä pH-alue: siksi on tärkeää säätää alustan pH odotetulle alueelle. Kun laboratorio valmistelee alustaa alustan koostumuksen mukaan, pH on tarkistettava ja säädettävä. On syytä huomauttaa, että myös valmistajan toimittaman valmiin synteettisen kuivatun väliaineen (etenkin joidenkin varastokuivattujen väliaineiden) lopullinen pH on mitattava koealustan valmistuksen jälkeen.
Tarkin tapa mitata väliaineen pH on pH-mittari. Ennen käyttöä se on kalibroitava standardipuskuriliuoksella, jonka pH on tunnettu (yleensä pH on 4-7). Huuhtele pH-mittarin elektrodi tislatulla vedellä ja upota se dekantterilasissa olevaan elatusaineeseen ja lue sitten viljelyalustan pH pH-mittarin asteikolta. Jokainen valmistaja tarjoaa yksityiskohtaiset käyttöohjeet jokaiselle pH-mittarityypille.
Viljelyalustaa valmistettaessa pH on helposti säädettävissä mekaanisella sekoituksella varustetulla pH-mittarilla. Viljelyalusta tulee valmistaa astiassa (kuten suuressa dekantterilasissa), jota voidaan sekoittaa jatkuvasti. tai teflonpäällysteiset magneetit. Agar-pitoisen väliaineen pH on säädettävä sulatuksen jälkeen, mikä on helppoa lämmitettävällä magneettisekoittimella. Kun säädät pH:ta, kalibroi pH-mittari ensin standardinmukaisella puskuriliuoksella, jonka pH on tunnettu. Laita sitten komposiittielektrodi ja vastuslämpömittari (jos sellainen on) väliaineeseen, lisää hitaasti sopiva määrä suolahappoa ja natriumhydroksidia dekantterilasin päästä elektrodista poispäin, jotta väliaine saavuttaa ja ylläpitää vaaditun pH:n.
pH-mittarin lämpötilakompensaatiossa tulee ottaa huomioon lämpötilan vaikutus elektrodijärjestelmään: joissakin laimennuksissa ja väliaineissa pH muuttuu huomattavasti lämpötilan mukaan. Nestemäisille väliaineille ja laimennoksille pH voidaan yleensä säätää ja mitata joko 25 asteessa tai lämpötilassa, jossa niitä käytetään.
Agar-alustan pH on säädettävä liukenemisen jälkeen ja liukenemislämpötila on yli 45 astetta: siksi kiinteän alustan pH tulee määrittää sen käyttölämpötilassa. Tässä vaiheessa tulee käyttää tasapäistä komposiittielektrodia ja pH-mittarin lämpötilakompensointi kalibroida manuaalisesti. Jos viljelyalustaa valmistettaessa todetaan, että viljelyalustan pH on erilainen sulamis- ja jähmettymistilan välillä, se tarkoittaa, että pH:n säätämisessä on virhe.
Samoin kun valmistettu väliaine lämpösteriloidaan (esim. autoklavoidaan), sen pH voi myös muuttua. Dehydratoidun väliaineen osalta valmistaja on ottanut tämän huomioon, eikä pH:ta yleensä tarvitse säätää, mutta käytettävän väliaineen pH kannattaa tarkistaa huolellisesti. Jos dehydratoidun agar-alustan pH-arvoa on säädettävä uudelleenliuottamisen tai valmistuksen aikana, on parasta säätää se suodattimella steriloidulla suolahapolla ja natriumhydroksidiliuoksella sterilointivaiheen jälkeen, jotta vältetään väliaineen ylikuumeneminen. Valmistettaessa alustaa erilaisilla raaka-aineilla tai lääkkeillä, väliaineiden pH on tarkistettava autoklaavikäsittelyn jälkeen. Lisäksi, jos väliaineen pH:n havaitaan muuttuvan samaksi jokaisen autoklaavin jälkeen, pH voidaan säätää sopivasti alustaa valmistettaessa. On kuitenkin edelleen tarpeen määrittää väliaineen lopullinen pH steriloinnin jälkeen.
