Kudoslohkon tilavuuden mittaaminen biologisilla mikroskoopeilla
Toistaiseksi kryofiksaatio, pakastettu ultra-ohut leikkaus ja pakastekuivaus{1}} ovat rutiinimenetelmiä kudos- ja soluröntgenmikroskoopiassa. Anna seuraavat tiedot tästä menetelmästä:
Kohdevalolla varustettu biologinen mikroskooppi voi liikuttaa kohdevaloa ylös ja alas kohtuullisen kirkkauden saavuttamiseksi, ja säädettävän aukon aukkoa voidaan myös muuttaa kohtuullisen kirkkauden saavuttamiseksi. Jos valo tulee auringosta, kohdevaloa voidaan nostaa sopivasti ja säädettävän valon aukkoa voidaan suurentaa sopivasti. Jos valo on liian voimakasta, kohdevaloa voidaan laskea sopivasti ja risteyksen aukkoa voidaan pienentää sopivasti. Jos sinusta tuntuu edelleen häikäisältä tässä tilanteessa, voit sijoittaa sopivan suodattimen valokeilaan kiinnikkeeseen. Tämä tammi voi saavuttaa sinua tyydyttävän kirkkauden. Tietenkin kohdevalon ylä- ja ala-asentoa säätämällä voidaan muuttaa valolukeman aukon kokoa ja valita sopivat suodattimet, mikä vaatii tietyn ajan harjoittelua ja kokemusta.
Erittäin tärkeä kysymys biologisessa mikroskopiassa on näytteenotto- ja solujen eristysprosessi. Pakastekuivauksen ja hartsi upotuksen (FD) jälkeen pakastetut ultra-ohuet osat on käsiteltävä huolellisesti, jotta jokaisen osan 65 elementin sisältö ei vaurioidu tarkkailun ja analyysin aikana. Röntgenmikroanalyysin lukuisten vaiheiden ja korkeiden kustannusten vuoksi on valitettavaa tehdä vääriä johtopäätöksiä, jos analysoidut solut ovat vahingoittuneet tai kuolleet pitkän ja monivaiheisen käsittelyn jälkeen. Gelatinaasikäsittelyllä erotetuilla sydänsoluilla on kaksi muotoa, joista toinen on pitkän sauvan -muotoinen ja toinen pyöreä. Jälkimmäinen viittaa kuoleviin soluihin, jotka vaurioituvat solujen erotteluprosessin aikana.
Elektrolyyttien sisältö ja jakautuminen näissä kahdessa solutyypissä ovat hyvin erilaisia biologisessa mikroskoopissa. Na on erittäin korkea ja K on erittäin alhainen sirkulaarisissa sydänlihassoluissa, ja Ca-pitoisuus lineaarisissa dendriiteissä on erittäin korkea. Muilla analyyttisilla menetelmillä tehdyn tarkastuksen jälkeen on todistettu, että pyöreäsolujen korkea Na ja alhainen K ja mitokondrioiden korkea Ca ovat seurausta kalvovauriosta solujen erottumisen aikana. Solujen ja kudosten kylmäkiinnitysmenetelmään kuuluu usein niiden ensin sammuttaminen ja sitten varastointi nestetypessä. Sammuttava kiinnitys on elintärkeää säilytysvaikutuksen kannalta. Elävissä soluissa tai tuoreissa kudoksissa on runsaasti vettä, ja sammutettaessa solujen tai kudosten osat, jotka joutuvat suoraan kosketukseen kylmäaineen kanssa (etenkin käytettäessä nestemäistä typpeä jäähdytykseen), jäätyvät ja kiinnittyvät usein ensin, jolloin muodostuu "kuori", joka estää solujen keskiosan murskaamisen ja kiinnittymisen. Siksi röntgenmikroanalyysiä suoritettaessa havaitaan usein, että suurempien solujen keskiosassa on jääkiteitä. Tämän tilanteen estämiseksi kylmäaineena käytetään ainetta, jonka sulamispiste on korkeampi kuin nestemäinen typpi, mutta alhaisempi 806c. Näitä aineita on monia, mutta niitä on helppo saada ja edullisin on tiivistetty propaani (kiehumispiste 42.120c, sulamispiste 187.10c, molekyylipaino 44.1), jolla on myös nopea jäähtymisnopeus. Mutta sen haittana on, että se on syttyvä.
