Mikrobimäärän mittaaminen - mikroskooppinen suoralaskentamenetelmä!
Bakteeripopulaatioiden kasvulle on tunnusomaista solujen määrän lisääntyminen tai solumateriaalin lisääntyminen. On olemassa useita menetelmiä solujen lukumäärän mittaamiseen, mukaan lukien suora mikroskooppinen laskenta, levymäärä, turbometria spektrofotometrillä, todennäköisin luku MPN ja kalvosuodatus. Soluaineiden mittausmenetelmiä ovat solun kuivapainon mittaaminen, solujen tiettyjen komponenttien, kuten typen, RNA:n ja DNA:n, pitoisuuden mittaaminen sekä aineenvaihduntatuotteiden mittaaminen. Yhteenvetona voidaan todeta, että mikrobikasvun mittaamiseen on monia menetelmiä, joista jokaisella on omat etunsa ja haittansa, ja valinnan tulee perustua työn erityisvaatimuksiin. Tämä kokeilu esittelee pääasiassa tuotannossa ja tieteellisessä työssä yleisesti käytettyä mikroskoopin suoralaskentamenetelmää.
Käyttötarkoitusvaatimukset
1. Selvennä periaatetta käyttää verisolulaskentataulua laskennassa.
2. Opi käyttämään verisolulaskentataulua mikrobien laskennassa.
2, perusperiaatteet
Mikroskooppinen suoralaskentamenetelmä on yksinkertainen, nopea ja intuitiivinen menetelmä pienen näytteen suspension laskemiseksi suoraan mikroskoopilla asettamalla se erityiselle lasilevylle, jolla on tietty pinta-ala ja tilavuus (tunnetaan myös nimellä bakteerilaskuri). Tällä hetkellä yleisesti käytettyjä bakteerienlaskentalaitteita kotimaassa ja ulkomailla ovat verisolujen laskentalevyt, Peteroff Hauser -bakteerinlaskentalaitteet ja Hawksley-bakteerinlaskentalaitteet, joita kaikkia voidaan käyttää hiiva-, bakteeri-, sieni-itiöjen jne. suspensioiden laskemiseen. samalla perusperiaatteella. Kahden jälkimmäisen bakteerilaskurityypin kokonaistilavuus on {{0}},02 mm3, kun ne on peitetty kansilasilla, ja kansilasin ja kantolevyn välinen etäisyys on vain 0,02 mm. Siksi öljyimmersioobjektiivia voidaan käyttää pienempien solujen, kuten bakteerien, tarkkailuun ja laskemiseen. Näiden bakteerilaskurien käytön lisäksi on olemassa myös estimointimenetelmä, jolla voidaan suoraan havainnoida sivelypinta-alan suhdetta pellon pinta-alaan mikroskoopilla, jota käytetään yleensä maidon bakteriologiseen tutkimukseen. Mikroskoopilla suoritetun laskennan edut ovat intuitiivisia, nopeita ja helppokäyttöisiä. Mutta tämän menetelmän haittana on, että mitatut tulokset ovat yleensä kuolleiden ja elävien solujen summa. Tällä hetkellä on olemassa joitakin menetelmiä, jotka voivat voittaa tämän haitan, kuten elävien solujen värjäyskammioviljelmän yhdistäminen (lyhyt aika) ja solunjakautumisen estäjien lisääminen vain elävien solujen laskemisen tavoitteen saavuttamiseksi.
Verisolujen laskentataulun käyttäminen esimerkkinä suorasta laskemisesta mikroskoopin alla. Kahden muun bakteerilaskurin käyttötavat löytyvät eri valmistajien käsikirjoista. Suora laskenta mikroskoopilla verisolulaskentalevyllä on yleisesti käytetty menetelmä mikrobien laskennassa. Laskentalauta on erityisesti valmistettu lasiliuku, jossa on neljä uraa, jotka muodostavat kolme alustaa; Keskellä oleva leveämpi taso on jaettu kahteen puolikkaaseen lyhyellä vaakasuoralla uralla ja lavan molemmilla puolilla on ristikko. Jokainen ruudukko on jaettu yhdeksään suureen ruudukkoon, ja keskellä oleva iso ruudukko on laskentahuone. Verisolujen laskentalevyn rakenne on esitetty kuvassa l{{0}}. Laskentahuoneen mittakaavassa on yleensä kaksi eritelmää. Yksi on, että suuri neliö on jaettu 25 keskimmäiseen ruutuun, ja jokainen neliö on jaettu edelleen 16 pieneen neliöön (kuva 15-2); Toinen tapa on jakaa suuri neliö 16 keskimmäiseen ruutuun, ja jokainen neliö jaetaan edelleen 25 pieneen neliöön. Laskulaudan koosta riippumatta jokaisessa suuressa ruudussa on kuitenkin 400 pientä ruutua. Jos jokaisen neliön sivun pituus on 1 mm, jokaisen suuren neliön pinta-ala on lmm2. Peitelasilla peittämisen jälkeen kansilasin ja lasin välinen korkeus on 0,1mm, joten laskentahuoneen tilavuus on 0,1mm3 (millilitran tuhannesosa). Kuva 15-1 Verisolujenlaskentataulun rakenne (I) Kuva 15-2 Verisolujenlaskentataulun rakenne (II) A Edestä; B. Pystyleikkausnäkymä; Laajennetun ruudukon keskellä on suuri neliö laskentahuoneena 1. Verisolujen laskentataulu; 2. Suojalasi; Laskentahuoneessa laskettaessa bakteerien kokonaismäärä lasketaan yleensä viidelle ruudulle, minkä jälkeen saadaan kunkin neliön keskiarvo kerrottuna 25:llä tai 16:lla, jolloin saadaan bakteerien kokonaismäärä suuressa neliössä, joka muunnetaan sitten bakteerien kokonaismäärä lml:ssa bakteeriliuosta. Olettaen, että bakteerien kokonaismäärä viidessä neliöruudussa on A ja bakteeriliuoksen laimennuskerroin on B. Jos neliöruudukossa on 25 laskentalevyä, bakteerien kokonaismäärä 1 ml:ssa bakteeriliuosta on A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Vastaavasti, jos neliöruudukossa on 16 laskentalevyä, bakteerien kokonaismäärä 1 ml:ssa bakteeriliuosta on A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
