Laserskannausmonifotomikroskooppien paremmat edut
Laserpyyhkäisy-monifotonimikroskooppi on optisen mikroskoopin merkittävä parannus, joka ilmenee pääasiassa kyvyssä tarkkailla elävien solujen, kiinteiden solujen ja kudosten syviä rakenteita ja saada selkeitä ja teräviä moni{0}}kerros Z-tasorakenteita, eli optisia viipaleita, joita voidaan käyttää kolmiulotteisten kiinteiden rakenteiden rakentamiseen. Konfokaalimikroskoopissa käytetään laservalolähdettä, joka laajennetaan täyttämään objektiivin koko polttotaso ja konvergoi sitten hyvin pieniksi pisteiksi näytteen polttotasolla objektiivilinssin linssijärjestelmän kautta. Objektiivin numeerisen aukon mukaan kirkkaimman valaistuspisteen halkaisija on noin 0,25-0,8 μm ja syvyys noin 0,5-1,5 μm. Konfokaalipisteen koon määräävät mikroskoopin rakenne, laseraallonpituus, objektiivin ominaisuudet, skannausyksikön tilan asetukset ja näytteen ominaisuudet. Kenttämikroskoopin valaistusalue ja syvyys ovat suuria, kun taas konfokaalimikroskoopin valaistus keskittyy polttopisteeseen polttotasolla. Konfokaalimikroskopian perusetu on, että sillä voidaan tehdä hieno optinen leikkaus paksuille fluoresoiville näytteille (jopa 50 μm tai enemmän), joiden paksuus on noin 0,5 - 1,5 μm. Sarja optisia siivukuvia voidaan saada liikuttamalla näytettä ylös ja alas mikroskoopin Z--akselin askelmoottorilla. Kuvatietojen keräämistä ohjataan * * -tasolla ilman näytteen muista kohdista lähetettävien signaalien häiriöitä. Taustafluoresenssin vaikutuksen poistamisen ja signaali-kohinasuhteen lisäämisen jälkeen konfokaalisten kuvien kontrasti ja resoluutio paranevat merkittävästi verrattuna perinteisiin kenttävalaistuksen fluoresenssikuviin. Monissa näytteissä monimutkaiset rakenneosat kutoutuvat yhteen muodostaen monimutkaisia järjestelmiä, mutta kun tarpeeksi optisia osia voidaan kerätä, voimme käyttää ohjelmistoa niiden rekonstruoimiseksi kolmiulotteisesti. Tätä kokeellista menetelmää on käytetty laajasti biologisessa tutkimuksessa solujen tai kudosten välisten monimutkaisten rakenteellisten ja toiminnallisten suhteiden selvittämiseen.
