Kuinka valita sopiva fluoresenssimikroskooppi
Fluoresenssimikroskooppi on standardi mikroskooppinen kuvantamislaitteisto laboratorioissa ja patologian osastoilla, joka käyttää fluoresenssiominaisuuksia havainnointiin ja kuvantamiseen. Sitä käytetään laajalti eri aloilla, kuten solubiologiassa, neurobiologiassa, kasvitieteessä, mikrobiologiassa, patologiassa, genetiikassa jne. Fluoresenssikuvantamisen etuna on korkea herkkyys ja spesifisyys, mikä tekee siitä erittäin sopivan tiettyjen proteiinien, organellien jne. jakautumisen tarkkailuun. kudoksissa ja soluissa, tutkimalla yhteispaikannusta ja vuorovaikutuksia, seuraamalla elämän dynaamisia prosesseja, kuten ionipitoisuuden muutoksia, ja niin edelleen.
Mikroskooppien valinta
Fluoresenssimikroskoopit jaetaan pääasiassa kolmeen luokkaan: pystyfluoresenssimikroskoopit (sopii viipalointiin), käänteisfluoresenssimikroskoopit (sopii eläviin soluihin ja myös leikkaamiseen) ja stereofluoresenssimikroskoopit (sopii suuremmille näytteille, kuten kasveille, seeprakalalle (aikuinen/aikuinen). alkio), medaka, hiiren/rotan elimet jne.).
Fluoresoivien suodatinlohkojen valinta
Suodatinlohkojen valinnassa ei tulisi ottaa huomioon vain fluoresoivien koettimien viritys- ja emissioaallonpituuksia, vaan myös, onko olemassa epäspesifistä viritystä ja onko monivärimerkityille näytteille värin ylikuulumista. Kokeessa valitaan viritykselle mahdollisimman pitkälle virityshuippua lähinnä oleva aallonpituus, ja vastaanottoalueeseen tulee sisältyä huippuemissio. Alexa Fluor 488:n virityshuippu on 500 nm, ja 480/40 virityssuodatin voidaan valita fluoresenssimikroskoopissa. Fluoresenssimikroskopiassa yleisesti käytetyt fluoresoivat suodatinlohkot voidaan jakaa kahteen tyyppiin: long pass (LP) ja kaistanpäästö (BP), jotka on myös valittava tarpeiden mukaan.
Konfokaalinen mikroskooppi
Perinteisissä fluoresenssimikroskooppihavainnoissa fluoresoivasti leimattujen aineiden ja spontaanien fluoresenssirakenteiden päällekkäisyyden vuoksi ne ovat tiukasti sidoksissa toisiinsa. Perinteiset putoavan fluoresenssimikroskopian objektiivit eivät kuitenkaan vain kerää valoa polttotasolta, vaan myös sirottavat valoa polttotasosta ylös ja alas, mikä johtaa kuvan resoluution ja kontrastin huomattavaan heikkenemiseen.
Konfokaalinen kuvantaminen havaitsee vain itsetarkennustasolta heijastuneen valon, mikä ratkaisee yllä olevan ongelman. Valonlähde muodostaa pienen ja hienon pisteen polttotasolle neulanreiän kautta, ja polttotasosta säteilevä valo kerätään objektiivin läpi. Suurin osa objektiivin polttotason ylä- tai alapuolelta emittoidusta fluoresenssista ei voi konvergoida neulanreikään. Vain polttotasossa oleva fluoresenssi ja pieni osa defokusoidusta fluoresenssista voivat kulkea neulanreiän läpi, kun taas polttotason ulkopuolella oleva valonsäde konvergoi reikälevyn eteen tai taakse ja on estetty pääsemästä ilmaisimeen neulanreiän kautta. Havaittu kuva on polttotasolta, joten lopullinen kuvanlaatu paranee huomattavasti.
Laserpyyhkäisykonfokaalimikroskopian eduista ja käytännöllisyydestä johtuen se on tällä hetkellä korvaamaton kokeellinen apulainen korkean tarkkuuden solubiologian, kasvitieteen ja solututkimuksen aloilla. Samalla siitä tulee tulevissa tieteellisissä tutkimuskeskuksissa perus- ja ydintutkimusväline.
