Miten fluoresenssimikroskopia eroaa konfokaalilasermikroskopiasta
Fluoresenssimikroskooppi
1. Fluoresenssimikroskooppi käyttää ultraviolettivaloa valonlähteenä tarkastettavan kohteen valaisemiseksi, jotta se emittoi fluoresenssia, ja sitten tarkkailee kohteen muotoa ja sijaintia mikroskoopin alla. Fluoresenssimikroskopialla tutkitaan aineiden imeytymistä ja kulkeutumista soluissa sekä kemiallisten aineiden jakautumista ja asemointia. Jotkut soluissa olevat aineet, kuten klorofylli, voivat fluoresoida ultraviolettisäteiden säteilytyksen jälkeen; jotkin aineet eivät itse pysty fluoresoimaan, mutta jos ne värjätään fluoresoivilla väriaineilla tai fluoresoivilla vasta-aineilla, ne voivat fluoresoida ultraviolettisäteillä säteilytyksen jälkeen. Fluoresenssimikroskopia on yksi tällaisten aineiden kvalitatiivisen ja kvantitatiivisen tutkimuksen työkaluista.
2. Fluoresenssimikroskoopin periaate:
(A) Valonlähde: Valonlähde säteilee valoa eri aallonpituuksilla (ultravioletista infrapunaan).
(B) Virityssuodattimen valonlähde: lähettää tietyn aallonpituuden omaavaa valoa, joka voi saada näytteen fluoresoimaan, samalla kun se estää valon, joka on hyödytön fluoresenssin stimuloinnissa.
(C) Fluoresoivat näytteet: Yleensä värjätty fluoresoivilla pigmenteillä.
(D) Estosuodatin: Estää viritysvalon, jota näyte ei absorboi, ja lähettää selektiivisesti fluoresenssia. Jotkut fluoresenssin aallonpituudet välittyvät myös selektiivisesti. Mikroskooppi, joka käyttää ultraviolettivaloa valonlähteenä saamaan valaistun kohteen fluoresoimaan. Knorr ja Hallowska kokosivat elektronimikroskoopin ensimmäisen kerran vuonna 1931 Berliinissä, Saksassa. Tämä mikroskooppi käyttää nopeaa elektronisuihkua valonsäteen sijaan. Koska elektronivirran aallonpituus on paljon lyhyempi kuin valon, elektronimikroskoopin suurennus voi nousta 800,000-kertaiseksi ja resoluution vähimmäisraja on 0,2 nanometriä. Pyyhkäisyelektronimikroskoopilla, jota alettiin käyttää vuonna 1963, ihmiset voivat nähdä esineiden pinnalla olevat pienet rakenteet.
3. Sovellusalue: Käytetään pienten esineiden kuvien suurentamiseen. Yleensä käytetään biologian, lääketieteen, mikroskooppisten hiukkasten jne.
konfokaalinen mikroskooppi
1. Konfokaalimikroskooppi lisää heijastuneen valon optiseen reittiin puoliheijastavan puolilinssin, joka taittaa linssin läpi kulkeneen heijastuneen valon muihin suuntiin. Siinä on ohjauslevy, jonka kohdistetaan neulanreikä, ja neulanreikä sijaitsee. Polttopisteessä, ohjauslevyn takana, on valomonistinputki. Voidaan kuvitella, että heijastunut valo ennen ja jälkeen ilmaisuvalon fokusoinnin kulkee tämän konfokaalisen järjestelmän läpi, eikä sitä voida tarkentaa pieneen reikään, vaan se tukkeutuu ohjauslevyllä. Joten se, mitä fotometri mittaa, on heijastuneen valon intensiteetti tarkennuksessa.
2. Periaate: Perinteiset optiset mikroskoopit käyttävät kenttävalonlähteitä, ja näytteen kunkin pisteen kuvaa häiritsee diffraktio tai vierekkäisistä pisteistä tuleva valonsironta. Laserpyyhkäisykonfokaalimikroskoopit käyttävät lasersäteitä pistevalolähteiden muodostamiseen valaisevien neulanreikien kautta näytteen sisäpuolen valaisemiseksi. Jokainen polttotason piste skannataan ja näytteen valaistu piste kuvataan tunnistusreikään, jonka havaitsemisen takana oleva valomonistinputki (PMT) tai kylmäkytkentälaite (cCCD) vastaanottaa piste pisteeltä tai rivi riviltä. neulanreikä, ja se on nopeasti Fluoresoiva kuva muodostuu tietokoneen näytön näytölle. Valaistuksen neulanreikä ja tunnistusneulanreikä ovat konjugoituja objektiivin linssin polttotasoon nähden. Polttotason pisteet kohdistetaan valaistuksen neulanreikään ja emissioneulanreikään samanaikaisesti. Polttotason ulkopuolella olevia pisteitä ei kuvata tunnistusreiässä. Tämä saadaan Konfokaalikuvat ovat näytteiden optisia poikkileikkauksia, jotka poistavat tavallisten mikroskooppien epäselvien kuvien puutteet.
3. Sovellusalat: Lääketiede, eläin- ja kasvitieteellinen tutkimus, biokemia, bakteriologia, solubiologia, kudosemryologia, elintarviketiede, genetiikka, farmakologia, fysiologia, optiikka, patologia, kasvitiede, neurotiede, meribiologia ja materiaalitiede, elektroniikka , mekaniikka, öljygeologia, mineralogia.
