Fluoresenssimikroskoopin käyttömenetelmät ja varotoimet
Käyttötapa:
(1) Aseta materiaaliarkki alustalle.
(2) Kytke fluoresenssimikroskoopin jännitteensäädin päälle. Paina sitten käynnistysryhmää sytyttääksesi UV-lamppua ei saa sammuttaa 15 minuuttiin, eikä sitä saa käynnistää uudelleen 3 minuuttiin sen sammuttamisen jälkeen.
(3)Käännä virityssuodatin asentoon v, dikroinen kalvo asentoon v, valitse 495 tai 475 nm estävä suodatin.
(4) Valitse uvFL40, uvFL100 fluoresenssia vastaanottava objektiivilinssimikroskooppi.
(5) Lisää ei-fluoresoivaa öljyä objektilasille ensin 40 x ja sitten 100 x tarkennusmikroskoopilla. Näytä fluoresenssi.
(7) Koska fluoresoiva materiaali ultraviolettisäteilyn kasvun kanssa fluoresenssin vähitellen heikentynyt ajan myötä, joten mikroskooppisen tutkimuksen tulisi usein vaihtaa näkökenttää.
(8) voi myös käyttää uvFL10- tai uvFL20-vähäsuurennusmikroskooppimateriaalia (pienellä suurennuksella lisäämättä ei-fluoresoivaa öljyä).
Fluoresenssikuvan tallennusmenetelmä:
Fluoresenssikuva nähdään fluoresenssimikroskoopilla, toinen on morfologisilla ominaisuuksilla, toinen on fluoresenssin värillä ja kirkkaudella, tuloksia arvioitaessa nämä kaksi on yhdistettävä kattavaan arviointiin. Tulokset kirjataan subjektiivisten indikaattoreiden mukaan, eli työntekijän visuaalisella havainnolla. Yleisenä laadullisena havainnona periaatteessa luotettava. Tekniikan ja tieteen kehittyessä, vaihtelevassa määrin, objektiivisten indikaattoreiden käyttö tuomion tulosten tallentamiseen, kuten soluspektrofotometrin, kuva-analysaattorin ja muiden välineiden käyttö. Näillä instrumenteilla kirjatut tulokset on kuitenkin yhdistettävä subjektiiviseen harkintaan.
Fluoresenssimikroskooppikuvaustekniikka on erittäin tarpeellinen fluoresenssikuvien tallentamiseen, koska fluoresenssi on helppo häivyttää ja heikentää, jotta valokuvauksen tulokset tallentuvat välittömästi. Menetelmä on periaatteessa sama kuin tavallinen mikrografia. Sinun tarvitsee vain käyttää nopeaa valokuvafilmiä, kuten ASA200 yläpuolella tai 24. yläpuolella. Koska ultraviolettivalo fluoresenssin puhkeamisen vaikutus, kuten FITC-markkerit, ultraviolettivalon säteilytys 30s, fluoresenssin kirkkautta vähennetään 50%. Siksi valotusnopeus on liian hidas fluoresenssikuvan ottamiseksi. Yleistutkimuksen fluoresenssimikroskoopeissa on puoliautomaattiset tai täysautomaattiset mikrovalokuvausjärjestelmälaitteet.
Varotoimenpiteet:
(1) Toimi tiukasti fluoresenssimikroskoopin tehdasoppaan vaatimusten mukaisesti, älä muuta menettelyä mielivaltaisesti.
(2) Tarkastus on suoritettava pimeässä. Kun olet saapunut pimeään, kytke virtalähde, sytytä ultrakorkeapaineinen elohopealamppu 5-15minuutiksi, odota, kunnes valonlähde lähettää voimakasta valoa vakiintuakseen ja silmät ovat täysin sopeutuneet pimeään ja aloita sitten näytteen tarkkailu.
(3) Jotta vältetään ultraviolettivalon aiheuttamat silmävauriot, valonlähdettä säädettäessä tulee käyttää suojalaseja.
(4) Tarkista aika joka kerta 1 ~ 2h on sopiva, yli 90min, ultra-korkeapaineinen elohopealamppu valovoima vähitellen vähentynyt, fluoresenssi heikentynyt; näytteet säteilytetty ultraviolettivalolla 3 ~ 5 min, fluoresenssi on myös merkittävästi heikentynyt; siksi * ei saa olla yli 2 ~ 3 tuntia.
(5) fluoresenssimikroskoopin valonlähteen käyttöikä on rajoitettu, näyte tulee tarkastaa keskitetysti ajan säästämiseksi ja valonlähteen suojaamiseksi. Kun se on kuuma, tulee lisätä tuuletinjäähdytys, uusi polttimo tulee tallentaa käytön alusta. Kun lamppu on sammunut ja sitä halutaan käyttää uudelleen, polttimo on jäähdytettävä riittävästi ennen syttämistä. Valonlähdettä tulee välttää useita kertoja.
(6) Tarkkaile näytettä välittömästi värjäyksen jälkeen, sillä fluoresenssi heikkenee vähitellen ajan myötä. Jos näyte laitetaan polyeteenimuovipussiin, jota säilytetään 4 asteessa, se voi viivyttää fluoresenssin heikkenemisaikaa ja estää tiivistysaineen haihtumisen.
(7) Fluoresenssin kirkkauden arviointiperusteet: yleensä jaettu neljään tasoon, toisin sanoen "yksi" - ei fluoresenssia tai näkyy heikko fluoresenssi. '+' - vain selkeä näkyvä fluoresenssi. '+ +' - näkyy kirkkaana
