Mikrobimikroskoopin suoran laskentamenetelmän kokeelliset periaatteet
Suora laskenta mikroskoopilla hemosytometrillä on yleisesti käytetty menetelmä mikro-organismien laskemiseen. Tämän menetelmän etuna on, että se on intuitiivinen ja nopea. Aseta asianmukaisesti laimennettu bakteerisuspensio (tai itiösuspensio) laskentakammioon hemosytometrin objektilasin ja kansilasin väliin ja laske mikroskoopilla. Koska laskentakammion tilavuus on kiinteä (0,1 mm2), se voidaan muuntaa mikro-organismien kokonaismääräksi tilavuusyksikköä kohti mikroskoopilla havaittujen mikro-organismien lukumäärän perusteella. Koska tämä menetelmä laskee elävien ja kuolleiden bakteerien kokonaismäärän, sitä kutsutaan myös bakteerien kokonaislaskentamenetelmäksi.
Hemosytometri on yleensä erityinen liukulasi, jossa on neljä koloa, jotka muodostavat kolme alustaa. Keskitaso on jaettu kahteen puolikkaaseen lyhyellä vaakasuuntaisella uralla. Lavan molemmille puolille on kaiverrettu neliöruudukko. Jokainen neliöruudukko on jaettu yhdeksään suureen neliöön. Suuri neliö keskellä on laskentahuone. Mikro-organismien laskenta tapahtuu laskentakammiossa. Hemosytometrin rakenne on esitetty kuvassa Ⅷ-1.
Laskentakammion asteikolla on yleensä kaksi eritelmää. Yksi on suuri neliö, joka on jaettu 16 keskikokoiseen neliöön, ja jokainen keskikokoinen neliö on jaettu 25 pieneen neliöön (kuva Ⅷ-2); toinen on iso neliö. Neliöruudukko on jaettu 25 keskikokoiseen ruutuun ja jokainen keskikokoinen neliö on jaettu 16 pieneen neliöön (kuva VIII-1, C). Mutta riippumatta siitä, millainen laskutaulu on kyseessä, pienten ruutujen määrä jokaisessa suuressa neliössä on sama, eli 16×25=400 pientä neliötä, kuten kuvassa Ⅷ-2 näkyy.
Jokaisen suuren neliön sivun pituus on 1 mm, joten jokaisen suuren neliön pinta-ala on 1 mm2. Kun kansilasi on peitetty, objektilasin ja kansilasin välinen korkeus on 0,1 mm, joten laskentakammion tilavuus on 0,1 mm3.
Laskettaessa tavallisesti laske bakteerien kokonaismäärä viidessä keskikokoisessa ruudussa, etsi sitten kunkin keskimmäisen neliön keskiarvo ja kerro sitten 16:lla tai 25:llä saadaksesi bakteerien kokonaismäärän suuressa neliössä, ja laske sitten Muunna bakteerien kokonaismäärä 1 ml:ssa bakteeriliuosta.
