Transmissiofluoresenssimikroskopian ja heijastusfluoresenssimikroskopian väliset erot ja edut ja haitat
1. Transmissiofluoresenssimikroskooppi: Viritysvalon lähde välitetään näytemateriaalin läpi kondensaattorin kautta fluoresenssin virittämiseksi. Yleisesti käytettyjä tummakenttäkeskittimiä tai tavallisia keskittimiä voidaan käyttää heijastimen säätämiseen viritysvalon ja sivuvalon muuntamiseksi näytteeseen. Tämä on suhteellisen vanhanaikainen fluoresenssimikroskooppi. Sen etuna on vahva fluoresenssi pienellä suurennuksella, kun taas sen haittana on, että sen fluoresenssi heikkenee suurennoksen kasvaessa. Siksi se on parempi tarkastella suurempia näytemateriaaleja.
2. Putoavan säteen fluoresenssimikroskooppi: Tämä on uudentyyppinen fluoresenssimikroskooppi, joka on kehitetty nykyaikana. Toisin kuin edellinen, viritysvalo putoaa objektiivilinssistä näytteen pinnalle käyttämällä samaa objektiivilinssiä kuin valaistuskondensaattori ja objektiivilinssi fluoresenssin keräämiseen. Optiseen polkuun on lisättävä kaksivärinen säteen erotin, joka muodostaa 45 asteen kulman fotouraanin kanssa. Viritysvalo heijastuu objektiiviin ja kerääntyy näytteeseen. Näytteen tuottama fluoresenssi ja objektiivin ja suojalasin pinnalta heijastuva viritysvalo menevät samanaikaisesti objektiivin linssiin ja palaavat kaksoisvärisäteen erottimeen erottaen viritysvalon ja fluoresenssin. Jäljellä oleva viritysvalo absorboituu sitten estosuodattimeen. Jos käytetään erilaisia virityssuodattimien, kaksoisvärisäteen erottimien ja estosuodattimien yhdistelmiä, ne voivat vastata erilaisten fluoresoivien reaktiotuotteiden tarpeisiin. Tämän fluoresoivan mikroskoopin etuja ovat tasainen näkökentän valaistus, selkeä kuva ja vahvempi fluoresenssi suuremmalla suurennuksella.
Transmissiofluoresenssimikroskopian edut ja haitat
Valonlähde: Korkeapaineelohopealamppu tai halogeenilamppu.
Kohdevalopeili: Tumman kentän kohdevalon käyttäminen virityksen ja fluoresenssin erottamiseen.
Objektiivilinssi: Voidaan käyttää mitä tahansa objektiivilinssiä.
Näyte: Ohuet näytteet sopivat paremmin lähetyshavaintoon.
Edut: ① Tumman kentän kondensaattorin käytön ansiosta viritysvalo ei pääse objektiivin linssiin, jolloin on helppo muodostaa tumma tausta ja saavuttaa hyvä kontrasti, ja mitä tahansa objektiivilinssiä voidaan käyttää havainnointiin. ② Kun käytetään vähän suurentavaa objektiivia, se on kirkkaampi kuin heijastava fluoresenssimikroskooppi.
Haitta: kohdevalon keskikohta ja korkeus on säädettävä oikein, muuten kirkasta fluoresoivaa kuvaa ei saada. Tumman kentän kohdevalon polttovälin rajoituksen vuoksi paksuja lasilevyjä ei voida käyttää. Näkökentän valaistusalueen ei tulisi olla liian suuri, sillä muuten se voi saada fluoresoivan näytteen fluoresenssivärin haalistumaan. Paksut tai läpinäkymättömät näytteet eivät sovellu.
Heijastavan fluoresenssimikroskopian edut ja haitat
Valonlähde: Korkeapaineelohopealamppu tai halogeenilamppu.
Tarkennuslinssi: Koska objektiivi toimii tarkennuslinssinä, tarkennuslinssiä ei tarvita.
Objektiivilinssi: Käytettävän objektiivin on kyettävä läpäisemään riittävästi ultraviolettivaloa, eikä se saa tuottaa itse fluoresenssia ilman numeerista aukkoa koskevia rajoituksia.
Näyte: Sekä paksuja että läpinäkymättömiä näytteitä voidaan havaita.
Edut: ① Koska objektiivi toimii myös kohdevalona, se ei vaadi paljon säätöä. ② Kolar-valaistusmenetelmää käyttämällä voidaan hyödyntää aukon ja näkökentän aukkojen vaikutuksia Objektiivin linssin numeerinen aukko ei ole rajoitettu, ja korkearesoluutioisia kuvia voidaan saada myös suurella suurennuksella Paksuja tai läpinäkymättömiä näytteitä voidaan myös ottaa havaitaan ja voidaan käyttää myös paksuja peitelaseja. Myös muita havaintomenetelmiä voidaan yhdistää heijastuneen fluoresenssin kanssa, erityisesti vaihe-eromenetelmällä ja transmissiodifferentiaalihäiriömenetelmällä. Sillä voidaan välttää tarpeeton fluoresenssin värin haalistuminen.
Haitta: Maasuurennusobjektiivia käytettäessä kuva on suhteellisen tumma, joten on käytettävä suuren numeerisen aukon objektiivia. Suodatinjärjestelmän tulee erottaa tehokkaasti viritysluminesenssi ja fluoresenssi.,
