Mikrobipopulaation määritys - suora mikroskooppinen laskentamenetelmä!
I. Käyttötarkoitusvaatimukset
1, Selventää hematokriittilevylaskennan periaatetta.
2, hallitse mikrobien laskentamenetelmä hematokriittilevyllä.
II. Perusperiaatteet
Mikroskoopin suoralaskentamenetelmä on pieni määrä näytteen suspensiota, joka testataan erityisellä objektilasilla, jolla on määrätty pinta-ala ja tilavuus (tunnetaan myös nimellä bakteriologinen laskuri), joka laskee mikroskoopissa suoraan yksinkertaisella, nopealla ja intuitiivisella menetelmällä. Tällä hetkellä kotimaisia ja ulkomaisia yleisesti käytettyjä bakteriologisia laskureita ovat: verisolujen laskentalevy, Peteroff-Hauser bakteriologiset laskurit ja Hawksley bakteriologiset laskurit jne., joita voidaan käyttää hiiva-, bakteeri-, homeitiöt ja muut laskentasuspensiot, perusperiaate on sama. Kahden jälkimmäisen laskurin kokonaistilavuus on 0.02 mm3 peitinlasin kiinnittämisen jälkeen, ja peitinlasien ja kantolevyn välinen etäisyys on vain 0,02 mm, joten pienemmät solut, kuten esim. bakteereja voidaan tarkkailla ja laskea öljyimmersioobjektiivilla. Näiden laskurien käytön lisäksi on olemassa myös estimointimenetelmä sivelypinta-alan ja näkökentän suhteen suoraan mikroskoopilla havaittuun pinta-alaan, jota käytetään yleisesti lehmänmaidon bakteriologisessa tutkimuksessa. Suoran mikroskoopin laskentamenetelmän edut ovat intuitiivisia, nopeita ja helppokäyttöisiä. Tämän menetelmän haittana on kuitenkin se, että tulos on yleensä kuolleiden ja elävien organismien summa. On olemassa joitakin menetelmiä tämän haitan voittamiseksi, kuten elävien bakteerien värjättyjen mikrokammioviljelmien yhdistelmä (lyhyt aika) ja sytokineesi-inhibiittoreiden lisääminen vain elävien organismien laskemisen tavoitteen saavuttamiseksi.
Toiminnan vaiheet
1, Bakteerisuspension valmistus
Käytä steriiliä suolaliuosta valmistaaksesi panimohiivasta sopivan pitoisuuden bakteerisuspensiota.
2, peilin laskentakammio
Ennen näytteiden lisäämistä on ensin tarkastettava laskentalevyn laskentakammio. Jos siinä on likaa, se on puhdistettava ja kuivattava ennen laskemista.
3, näytteiden lisääminen
Puhdista ja kuivaa kansilasilla päällystetty verisolulaskentalevy ja ravista sitten steriilillä kapillaaribyretillä panimohiivasuspensiota peitinlasin reunalta niin, että bakteerinestettä putoaa rakoa pitkin kapillaarin tunkeutuessa laskentakammio automaattisesti, yleensä laskentakammio voidaan täyttää bakteerinesteellä. Näytteitä otettaessa bakteeriliuosta tulee ensin ravistaa hyvin; näytteitä lisättäessä laskentakammiossa ei saa olla ilmakuplia.
4, Mikroskooppilaskenta
Näytteen lisäämisen jälkeen anna sen levätä 5 minuuttia, aseta sitten verisolujen laskentalevy mikroskoopin alustalle, etsi ensin laskentakammion sijainti pienellä suurennuksella ja vaihda se sitten suureen suurennokseen laskentaa varten. Säädä mikroskoopin valon voimakkuutta sopivasti, sillä heijastinvalolla varustetussa mikroskoopissa tulee myös kiinnittää huomiota siihen, että valo ei saa olla vinoutunut toiselle puolelle, muuten näkökenttää ei ole helppo kääntää selkeäksi laskentakammion ruudukkoviivaa, tai näet vain pystyviivan tai vain vaakaviivan. Jos bakteerineste todetaan liian paksuksi tai liian ohueksi ennen laskemista, laimennus on säädettävä uudelleen ennen laskemista. Yleiset näytteen laimennusvaatimukset, joissa on noin 5-10 bakteeria kussakin solussa, ovat asianmukaiset. Jokaiselle laskentakammiolle valitaan organismit 5 keskilokerossa (4 kulmaa ja yksi keskiosasto keskellä) laskemista varten. Ristikkoviivoilla sijaitsevat organismit lasketaan yleensä vain ylä- ja oikealle riville. Hiivan orastuessa, kun orastava runko saavuttaa puolet emosolun koosta, se lasketaan kahdeksi organismiksi. Näytteen laskeminen kahdesta laskentakammiosta keskiarvossa näytteen bakteeripitoisuuden laskemiseksi.
5. Hematokriittilevyn puhdistaminen
Huuhtele verisolulaskentalevy käytön jälkeen vedellä hanan alla, älä käytä kovia esineitä pesemiseen ja harjaamiseen, kuivaa sitä itse tai föönaa sitä kuivaamaan pesun jälkeen. Tarkasta levy mikroskooppisesti nähdäksesi, onko kussakin osastossa jäännösorganismeja tai muita saostumia. Jos se ei ole puhdas, pesu on toistettava, kunnes se on puhdas.
