Fluoresenssimikroskoopin periaate ja rakenteelliset ominaisuudet
Fluoresenssimikroskooppi käyttää korkean valotehokkuuden pistettä säteilemään tietyn aallonpituuden omaavaa valoa (kuten ultraviolettivaloa 3650 tai violetti-sinistä valoa 4200) värisuodatinjärjestelmän läpi viritysvalona ja virittää sitten näytteessä olevat fluoresoivat aineet emittoimaan. fluoresenssi eri väreillä ja sitten tarkkailee niitä objektiivin ja okulaarin vahvistuksen kautta. Tällä tavalla voimakkaan kontrastitaustan alla, vaikka fluoresenssi on erittäin heikko, se on helppo tunnistaa ja sen herkkyys on korkea. Sitä käytetään pääasiassa solurakenteen ja toiminnan sekä kemiallisen koostumuksen tutkimiseen. Fluoresenssimikroskoopin perusrakenne koostuu tavallisesta optisesta mikroskoopista ja joistakin lisävarusteista (kuten fluoresoiva valonlähde, virityssuodatin, dikroinen säteen jakaja ja estosuodatin jne.). Fluoresoiva valonlähde —— Yleisesti käytetään ultrakorkeapaineista elohopealamppua (50-200W), joka voi lähettää valoa eri aallonpituuksilla, mutta jokaisella fluoresoivalla aineella on viritysvalon aallonpituus, joka tuottaa voimakkaimman fluoresenssin, joten se on on tarpeen lisätä virityssuodattimia (yleensä ultravioletti-, violetti-, sininen ja vihreä virityssuodattimet), jotta näytteeseen siirtyy vain tietty aallonpituus viritysvaloa ja kaikki muu valo absorboituu. Kun kutakin ainetta on säteilytetty viritysvalolla, se emittoi näkyvää fluoresenssia kauemmin kuin säteilytyksen aallonpituus hyvin lyhyessä ajassa. Fluoresenssilla on spesifisyys, joka on yleensä viritysvaloa heikompi. Erityisen fluoresenssin havaitsemiseksi on tarpeen estää (tai vaimentaa) objektiivilinssin takana ja niitä on käytettävä yhdessä.
Ero fluoresenssimikroskoopin ja yleisen mikroskoopin välillä
1. Valaistustila on yleensä episodinen, eli valonlähde heijastetaan näytteeseen objektiivin läpi;
2. Valonlähde on ultraviolettivalo, jolla on lyhyt aallonpituus ja korkeampi resoluutio kuin tavallinen mikroskooppi;
3. On olemassa kaksi erityistä suodatinta, valonlähteen edessä olevaa käytetään suodattamaan näkyvää valoa ja okulaarin ja objektiivin välissä olevaa ultraviolettivaloa suojaamaan ihmisten silmiä.
Fluoresenssimikroskooppi on myös eräänlainen optinen mikroskooppi, suurin ero on, että niiden viritysaallonpituudet ovat erilaisia. Tämä määrittää eron fluoresenssimikroskoopin ja tavallisen optisen mikroskoopin välillä rakenteessa ja käytössä.
Fluoresenssimikroskooppi on immunofluoresenssisytokemian perustyökalu. Se koostuu valonlähteestä, suodatinlevyjärjestelmästä ja optisesta järjestelmästä. Se käyttää tietyn aallonpituuden omaavaa valoa näytteen virittämiseen lähettämään fluoresenssia ja suurentaa sen objektiivilinssin ja okulaarijärjestelmän kautta tarkkaillakseen näytteen fluoresenssikuvaa.
