Mitkä ovat valomikroskopian näytevaatimukset?
Optisen mikroskoopin näytteenvalmistusprosessissa näytteen viipaleen paksuus on 2 - 25 um; elektronimikroskoopin viipaleen paksuus on 50-100nm sisällä (paitsi suurjänniteelektronimikroskoopilla näytteen paksuus voi olla 1um), joten käytetty viipalointimenetelmä ei ole sama.
Kantajan kannalta optisen mikroskoopin osan kantoaine on lasilevy ja elektronimikroskoopin osan kantaja on kantoverkko.
Kiinnityksen kannalta optiset mikroskoopin osat kiinnitetään yhdistefiksatiivilla, kun taas elektronimikroskoopin osat kiinnitetään toistuvasti yhdellä kiinnitysaineella
Värjäyksen kannalta optisten näytteiden värjäys on suhteellisen yksinkertaista. Erilaisten havainnointinäytteiden ja optisen mikroskoopin tyypin mukaan riittää yleensä joidenkin kiinteiden värjäysten käyttö. Elektronimikroskoopin näytteiden uudelleenvärjäysmenetelmiä on monia, ja ne ovat myös erittäin monimutkaisia, kuten negatiivivärjäys, hopeavärjäys ja niin edelleen.
Mitä tulee upotukseen, parafiinia, kolloodia, gelatiinia jne. käytetään upotusaineina optisissa mikroskoopin leikkeissä; epoksihartsia, polystyreenihartsia, isobutyleenihartsia ja vesiliukoista hartsia käytetään upotusaineina elektronimikroskoopin osissa.
Jotta mikroskoopin näkökenttä saa tasaisen ja riittävän valaistuksen, valaistuksen optista polkujärjestelmää on säädettävä, kun mikroskooppi asennetaan ensimmäisen kerran ja virheenkorjaus tehdään. vaatimukset. Lisäksi valaistuksen optisen polkujärjestelmän säädön oikea ymmärtäminen on välttämätön vaihe lampun vaihdon jälkeen mikroskoopin käytön aikana, ja se on myös välttämätön keino testata mikroskoopin suorituskykyä ajoittain päivittäinen käyttöprosessi. Mikroskoopin valaistuksen optisen polun järjestelmän säätö sisältää pääasiassa seuraavat 4 kohtaa: 1. Valonlähteen lamppukammion alustava säätö mikroskoopin ulkopuolella ① Avaa ensin lamppukammion kuori ja aseta halogeenilamppu kantaan painamalla jousiklipsi. Polttimoon jäänyt lika, kuten sormenjäljet, vaikuttaa polttimon käyttöikään. ②Aseta lamppuhuone pöydälle, virran kytkemisen jälkeen säädä erityisellä ruuvitaltalla lampun tarkennusnupin reikää (merkitty "←→"), niin että hehkulanka heijastuu seinään 1-2 m päässä, ja hehkulangan kuvaa säädetään. Säädä sitten lampun korkeutta säätääksesi hehkulangan reikää (merkitty "──"), jotta hehkulangan asento on sopiva; säädä sitten lampun vasemman ja oikean asennon säätöruuvin reikiä (merkitty "──") niin, että hehkulangan vasen ja oikea asento on sopiva .
2. Valonlähteen valaisimen (filamentin) asennon tarkastuksen ja korjauksen mikroskoopissa tarkoituksena on säätää valaisimen kuvan pää objektiivin linssin näkökenttään ja varmistaa, että näkökenttä mikroskoopin kuva vastaanotetaan täysin ja tasaisesti valonlähteen näkökulmasta. Valaistus, joka on Kühler-valaistusjärjestelmän säätämisen edellytys. Tarvittavat perustyökalut: Keskitysteleskoopit on varustettu mikroskoopilla. ① Irrota lamppukotelon himmeä lasiholkki ja aseta lamppupesä takaisin mikroskoopille ② Valitse 10× objektiivilinssi, käynnistä valonlähdeohjelma löytääksesi näytteen ja säädäksesi tarkennusta selkeästi, ja käytä sitten 40× objektiivia. linssi näytteen tarkentamiseksi selkeästi (40× objektiivilinssi Hehkulangan koko kuva näkyy selvästi); ③ Avaa sekä lauhduttimen aukkokalvo että kenttäkalvo maksimissaan; ④ Irrota toinen okulaarista, vaihda se keskitysteleskoopilla, tartu valkoiseen osaan ja vedä mustaa okulaaria toisella kädellä. Hehkulangan kuva näkyy näkökentässä; ⑤Jos filamentin asento ei ole sopiva, säädä "──"-reikä, säädä filamentin kuvaa vaakasuunnassa, säädä "──"-reikä ja säädä filamentin kuvaa pystysuunnassa, kunnes Säädä filamentin kuva pyöreäksi kuva, joka juuri täyttää objektiivin aukon; ⑥ Aseta huurrelasiholkki säädön jälkeen takaisin alkuperäiseen asentoonsa, irrota keskitysteleskooppi ja vaihda okulaari seuraavaa säätöä varten. Edellä mainittu valaistuksen valonlähdelamppuhuoneen säätö mikroskoopin ulkopuolella ja valonlähteen valaisimen asennon kalibrointi mikroskoopin sisällä on suoritettava vain, kun mikroskooppi asennetaan ja viankorjaus tehdään ensimmäistä kertaa ja polttimo on vaihdettu. Epäselvyyden sattuessa voit palauttaa sen alkuperäiseen tilaan yllä olevien vaiheiden mukaisesti.
3. Kohler-valaistusjärjestelmän (Kohler) oikea säätö Mikroskoopin oikea säätö, yksi päätehtävistä on valaistuksen valopolkujärjestelmän säätö ja avain on Kohler-valaistusjärjestelmän säätö. Jokaisella mikroskooppia käyttävällä, erityisesti mikrokuvia ottavilla, tulisi olla tietty ymmärrys ja hallinta Kühler-valaistusjärjestelmän ja sen säätövaiheiden periaatteet, jotta he voivat antaa täyden pelin mikroskoopin toiminnoille. Tuloksena olevat valokuvat voivat olla johdonmukaisempia ja täydellisempiä. Kühler-valaistusjärjestelmän periaate on yksinkertainen: minkä tahansa valonlähdevalaisimen pisteen lähettämä valo voi valaista mikroskoopin näkökenttää, ja valonlähdevalaisimen kunkin pisteen lähettämä valo kerätään, ja se on mikroskoopin näkökenttä. Saavutetaan erittäin riittävä ja tasainen valaistus. Kuhler-valaistusjärjestelmän säädön tarkoituksena on saada tasainen ja riittävä valaistus havaittavaan näkökenttään sekä estää hajavaloa vaikuttamasta tai häiritsemästä kuvantamisjärjestelmää, jotta vältetään sumun muodostuminen negatiiviin valokuvauksen aikana. Korkeasäätöisen Kühler-valaistusjärjestelmän keskeiset osat: kenttäkalvo, lauhdutinjärjestelmä akselin säädöllä. ① Valitse 10× objektiivilinssi ja 10× okulaari ② Aseta kondensaattorin etulinssi optiselle reitille, säädä aukon kalvo kohtuulliseen asentoon (ei liian suuri tai ei liian pieni) ja nosta sitten kondensaattori. yläasentoon ja säädä lauhduttimen kääntöpöytä Kirkas kenttä "J" -asentoon ③ Säädä kentän kalvo minimiin (0,1)
④ Aseta sinetöity biologinen näyte lavalle, kytke valonlähde päälle ja tarkenna selvästi
⑤ Näkökenttään ilmestyy paikallisesti valaistu alue tai kirkas piste, joka on sumea kuva kenttäkalvosta, jossa näytteen yksityiskohdat näkyvät selvästi; Katso näytteen yksityiskohdat selvästi
⑥ Laske lauhdutinta hieman, jotta näkökentän kirkas piste kapenee vähitellen ja muuttuu vähitellen selkeäksi monikulmiokuvaksi, joka on kenttäkalvon selkeä kuva;
⑦ Normaaleissa olosuhteissa monikulmiokuva ei ole näkökentän keskellä. On tarpeen säätää paria lauhduttimen keskitysruuvia, jotta näkökentän monikulmiokuva voidaan säätää keskiasentoon;
⑧ Avaa asteittain näkökentän kalvo, jotta monikulmiokuvasta tulee näkökentän piirretty monikulmio, ja tarkista edelleen kohdistusolosuhteet. Jos kohdistus ei ole ihanteellinen, jatka kohdistusruuvin säätämistä hieman;
⑨ Avaa kenttäkalvoa hieman, jotta monikulmiokuva katoaa näkökentän reunalta. Tässä vaiheessa Kühler-valaistusjärjestelmän säätö on valmis. Kühler-valaistusjärjestelmän säätämisen jälkeen koko näkökenttä valaistui tasaisesti ja mikrokuvat olivat kirkkaita ja selkeitä normaalilla kontrastilla.
