Mitkä ovat konfokaalisen lasermikroskopian edut?
Perinteisiin laajakenttämikroskooppeihin verrattuna laserpyyhkäisykonfokaalimikroskoopilla on teräväpiirto, korkea resoluutio ja korkea herkkyys. Sitä käytetään laajasti biolääketieteen alalla, ja siitä on tullut tärkeä kuvantamistyökalu tällä alalla. Miksi confocal voi saada niin paljon rakkautta, ja mitä etuja sillä on? Tässä artikkelissa luetellaan kolme näkökohtaa, joilla keskustellaan konfokaalin eduista.
Kerää signaali vain polttotasolla, jolloin kuva on selkeä ja epätarkka
Joten miten konfokaalimikroskopialla saavutetaan tämä etu? Tämä johtuu keskeisestä konfokaalilaitteistosta – neulanreiästä, kuten kuvassa 2 on esitetty. Se on pieni reikä ilmaisimen edessä ja sijoitettu optiselle tasolle konjugoituna näytteen polttotason kanssa. Kun viritysvalo säteilyttää näytettä, sekä näytealueen polttotaso että ei-fokusoiva taso virittyvät muodostamaan fluoresenssisignaaleja, säätämään sopivaa neulanreiän kokoa (yleensä 1 Au), jotta fluoresenssisignaali polttotasolla (vihreä katkoviiva) voivat olla fluoresoivia signaaleja (punaiset ja siniset katkoviivat), jotka kulkevat neulanreiän läpi päästäkseen tunnistimeen polttotasosta, eivät pääse ilmaisimeen neulanreiän kautta. Lisättäessä laitteiston reikiä, konfokaali voi saada selkeitä ja laadukkaita kuvia muuttamatta tavallisten fluoresenssimikroskooppien valmistusmenetelmää.
Neulanreiän olemassaolon ansiosta voimme saada signaalin vain polttotasolla ja saada korkearesoluutioisen kaksiulotteisen kuvan. Jatkuvasti säätämällä Z-akselin asentoa voidaan saada kaksiulotteisia kuvia eri Z-akselin asennoista ja sarja jatkuvia "optisia viipaleita" voidaan saada. Kun nämä optiset viipaleet on saatu, instrumenttiohjelmistolla varustettua 3D-moduulia voidaan käyttää rekonstruoimaan 3D-kuva selkeän 3D-kuvan luomiseksi. Tämä tuhoamaton, jatkuva kokoelma optisia siivukuvia toteuttaa "solu-CT:n" toiminnon.
Kolokalisaatiotulosten tarkkuus liittyy läheisesti kuvan resoluutioon, joten meidän on valittava korkeamman resoluution kuvantamismenetelmä kolokalisaatiokokeita suoritettaessa. Perinteisiin mikroskoopeihin verrattuna konfokaalimikroskopiasta on tullut tehokas työkalu kolokalisaatiotutkimuksessa sen korkean resoluution etujen ansiosta.
Diffraktiorajan olemassaolon vuoksi tavanomainen konfokaalinen optinen resoluutio on noin 200 nm. Kun meidän täytyy tarkkailla rakenteita, jotka ovat suurempia kuin 200 nm, konfokaalinen voi määrittää tarkasti kolokalisaatioasteen. Jos kolokalisaatioanalyysiä tarvitaan, voidaan valita konfokaaliohjelmistolla varustettu kolokalisaatioanalyysimoduuli.
