Fluoresenssimikroskoopin tarkoitus, ominaisuudet ja käyttö
Fluoresenssimikroskoopin periaate ja rakenteelliset ominaisuudet: fluoresenssimikroskoopissa käytetään korkean valotehokkuuden pistevalolähdettä, joka lähettää tietyn aallonpituuden valoa (kuten ultraviolettivaloa 3650 tuumaa tai purppuransinistä valoa 4200 tuumaa) suodatinjärjestelmän läpi viritteenä. valoa stimuloimaan näytteen fluoresenssia. Kun aine emittoi erivärisiä fluoresenssia, se havaitaan objektiivin ja okulaarin suurennuksen kautta. Tällä tavalla voimakkaan kontrastitaustan alla, vaikka fluoresenssi on erittäin heikko, se on helppo tunnistaa ja sen herkkyys on korkea. Sitä käytetään pääasiassa solujen rakenteen ja toiminnan sekä kemiallisen koostumuksen tutkimukseen. Fluoresenssimikroskoopin perusrakenne koostuu tavallisesta optisesta mikroskoopista sekä eräistä lisävarusteista (kuten fluoresoiva valonlähde, virityssuodatin, kaksivärinen säteen jakaja ja estosuodatin jne.). Fluoresoiva valonlähde – käytetään yleensä ultrakorkeapaineista elohopealamppua (50-200W), joka voi lähettää valoa eri aallonpituuksilla, mutta jokaisella fluoresoivalla aineella on voimakkaimman fluoresenssin tuottava viritysaallonpituus, joten virityssuodatin ( Yleensä on ultravioletti-, purppura-, sininen ja vihreä virityssuodattimet), jotka päästävät vain tietyn aallonpituuden omaavan viritysvalon kulkemaan läpi ja säteilyttävät näytteen samalla, kun ne absorboivat muuta valoa. Kun kutakin ainetta on säteilytetty viritysvalolla, se emittoi näkyvää fluoresenssia pidemmällä aallonpituudella kuin säteilytyksen aallonpituus hyvin lyhyessä ajassa. Fluoresenssi on spesifistä ja yleensä viritysvaloa heikompaa. Tietyn fluoresenssin havaitsemiseksi objektiivin takana tarvitaan estävä (tai vaimentava) suodatin.
Sillä on kaksi tehtävää: toinen on absorboida ja estää viritysvaloa pääsemästä okulaariin, jotta se ei häiritse fluoresenssia ja vahingoita silmiä; toinen on valita spesifinen fluoresenssi ja päästää sen läpi näyttäen tiettyä fluoresoivaa väriä. Molempia suodattimia tulee käyttää yhdessä.
Fluoresenssimikroskooppeja on kahta tyyppiä niiden optisten reittien suhteen:
1. Transmissiofluoresenssimikroskooppi: Viritysvalon lähde johdetaan näytemateriaalin läpi kondensaattorilinssin läpi fluoresenssin virittämiseksi. Yleisesti käytetään tummakenttäkerääjää, ja tavallisella keräimellä voidaan myös säätää peiliä niin, että viritysvalo ohjataan uudelleen ja ohitetaan näytteeseen. Tämä on vanhempi fluoresoiva mikroskooppi. Etuna on, että fluoresenssi on voimakas pienellä suurennuksella, mutta haittana on, että fluoresenssi pienenee suurennoksen kasvaessa. Siksi on parempi tarkkailla suurempia näytemateriaaleja.
2. Epi-fluoresenssimikroskooppi on uudentyyppinen fluoresenssimikroskooppi, joka on kehitetty nykyaikana. Erona on, että viritysvalo putoaa objektiivilinssistä alas näytteen pintaan, eli samaa objektiivilinssiä käytetään valaistuksen kondensaattorina ja objektiivilinssinä fluoresenssin keräämiseen. Dikroinen säteenjakaja on lisättävä valopolkuun, joka on 45 asteen päässä kevyestä uraanista. Viritysvalo heijastuu objektiiviin ja kerätään näytteeseen. Näytteen tuottama fluoresenssi ja objektiivin linssin pinnasta ja suojalasipinnasta heijastuva viritysvalo saapuvat objektiiviin samanaikaisesti ja palaavat kaksiväriseen säteenjakajaan viritysvaloksi. Erotettu fluoresenssista , jäännösviritysvalo absorboituu estosuodattimiin. Se voi vastata erilaisten fluoresoivien reaktiotuotteiden tarpeisiin, kuten vaihtamalla eri virityssuodattimen / kaksivärisen säteen jakajan / estosuodattimen yhdistelmään. Tällaisen fluoresenssimikroskoopin etuna on, että näkökentän valaistus on tasainen, kuvantaminen on selkeää ja mitä suurempi suurennus, sitä voimakkaampi fluoresenssi.
(2) Kuinka käyttää fluoresenssimikroskooppia.
1. Kytke valonlähde päälle, niin ultrakorkeapaineisen elohopealampun on lämmettävä muutaman minuutin ajan, jotta se saavuttaa kirkkaimman pisteen.
2. Transmissiofluoresenssimikroskoopin on asennettava tarvittava virityssuodatin valonlähteen ja kondensaattorin väliin ja vastaava estosuodatin objektiivin taakse. Epifluoresenssimikroskooppien on asetettava tarvittavat virityssuodatin/kaksivärisäteenjakaja/estävä suodatinosat optisen polun aukkoihin.
3. Tarkkaile pienellä suurennosobjektiivilla ja säädä valonlähteen keskikohta niin, että se sijaitsee koko valaistuspisteen keskellä eri mallien fluoresenssimikroskooppien säätölaitteen mukaan.
4. Aseta näytekappale ja tarkkaile tarkennuksen jälkeen. Huomio on kiinnitettävä käytön aikana: älä katso suoraan päätysuodattimeen, jotta et vahingoita silmää; kun tarkastelet näytteitä öljylinssillä, sinun on käytettävä erityistä öljylinssiä ilman fluoresenssia; kun korkeapaineelohopealamppu on sammutettu, sitä ei voi sytyttää heti uudelleen, vaan se on testattava. Se voidaan käynnistää uudelleen 5 minuutin kuluttua, muuten se on epävakaa ja vaikuttaa elohopealampun käyttöikään.
(3) Havainto Käyttämällä siniviolettia valosuodatinta fluoresoivan mikroskoopin alla opetusalustalla voidaan nähdä, että o. 01 prosenttia akridiinioranssilla fluoresoivalla väriaineella värjätyistä soluista, tuma ja sytoplasma viritetään tuottamaan kaksi erilaista fluoresenssiväriä (tummanvihreä ja oranssinpunainen).
