Fluoresenssimikroskoopin tekniset parametrit ja käyttötaidot
Fluoresenssimikroskoopin tekniset parametrit 1. Laajakulmainen okulaari 2. Akromaattinen objektiivilinssi 3. Nelireikäinen objektiivimuunnin 4. Putoava fluoresenssilaite Sininen (B) Vihreä (G) viritysjärjestelmä 100W elohopealamppu 5. Koaksiaalinen karkea mikrotarkennusmekanismi: tarkennusalue 15 mm Mikroristikon arvo 0,002 mm 6. Kaksikerroksinen mekaaninen työpöytä pituussuuntainen liikealue: 70 mm Sivusuuntainen liikealue: 50 mm
Fluoresenssimikroskoopin tekniset parametrit
1. Laajakulmainen okulaari
2. Akromaattinen objektiivi
3. Nelireikäinen objektiivin muunnin
4. Putoavan fluoresenssilaitteen sininen (B) vihreä (G) herätejärjestelmä 100 W elohopealamppu
Koaksiaalinen karkea mikrotarkennusmekanismi: tarkennusalue: 15 mm, mikroruudukon arvo: 0,002 mm
6. Kaksikerroksinen mekaaninen työpöytä
Pituussuuntainen liikealue: 70 mm Sivusuuntainen liikealue: 50 mm
Vinkkejä ja menetelmiä fluoresenssimikroskopian käyttöön
(1) Dia
Luistin paksuuden tulee olla 0,8–1,2 mm. Jos objektilasi on liian paksu, se toisaalta imee liikaa valoa, toisaalta se ei voi saada herätevaloa kerääntymään näytteeseen. Luistin tulee olla sileä ja puhdas, tasapaksuinen ja ilman merkittävää spontaania fluoresenssia. Joskus tarvitaan kvartsilasilevyjä.
(2) Peitelasi
Peitelasin paksuus on noin 0,17 mm, ja se on sileä ja puhdas. Herätyksen tehostamiseksi voidaan käyttää myös häiriösuojalasia. Tämä on erityinen peitelasi, joka on päällystetty useilla ainekerroksilla (kuten magnesiumfluoridilla), joilla on erilaisia häiriövaikutuksia eri valon aallonpituuksilla. Se voi sallia fluoresenssin kulkea tasaisesti heijastaen samalla viritystä, joka voi virittää näytettä.
(3) Näyte
Kudosleikkeet tai muut näytteet eivät saa olla liian paksuja. Esimerkiksi, jos ne ovat liian paksuja, suurin osa viritysvalosta kuluu näytteen alaosassa, kun taas objektiivin linssin suoraan havaitsema yläosa ei ole tarpeeksi virittynyt. Lisäksi solujen päällekkäisyys tai epäpuhtauksien peittäminen voi vaikuttaa harkintaan.
(4) Asennusaine
Glyseriiniä käytetään yleisesti kiinnitysaineena, ja sen on oltava vapaa spontaanista fluoresenssista, väritön ja läpinäkyvä. Fluoresenssin kirkkaus on kirkkaampi pH:ssa 8,5 - 9,5, eikä se ole helppo haalistua nopeasti. Siksi kiinnitysaineena käytetään yleisesti vastaavaa seosta, jossa on glyserolia ja 0,5 mol/l karbonaattipuskuriliuosta, jonka pH on 9.0 - 9,5.
(5) Peiliöljy
Yleensä käytettäessä tummakenttäfluoresenssimikroskooppia ja öljymikroskooppia näytteiden tarkkailuun on käytettävä linssiöljyä. On parasta käyttää erityistä ei-fluoresoivaa linssiöljyä, joka voidaan myös korvata edellä mainitulla glyserolilla. Myös nestemäistä parafiinia voidaan käyttää, mutta taitekerroin on alhainen, mikä vaikuttaa hieman kuvanlaatuun.
