Fluoresenssimikroskoopin rakenne ja pääkomponentit
Fluoresenssimikroskopia on tärkeä työkalu immunofluoresoivassa sytokemiassa. Se koostuu pääkomponenteista, kuten valonlähteestä, suodatinlevyjärjestelmästä ja optisesta järjestelmästä. Se on käyttää tiettyä valon aallonpituutta näytteen virittämiseksi lähettämään fluoresenssia ja tarkkailla näytteen fluoresenssikuvaa vahvistamalla objektiivilinssiä ja okulaarijärjestelmää.
Fluoresenssimikroskoopin rakenne ja pääkomponentit
(1) Valonlähde
Nykyään valonlähteinä käytetään usein 200 W:n ultrakorkeapaineisia elohopealamppuja. Ne on valmistettu kvartsilasista, joiden keskellä on pallomainen muoto, ja sisään on täytetty tietty määrä elohopeaa. Työn aikana kahden elektrodin välinen purkaus saa elohopean haihtumaan ja pallon ilmanpaine nousee nopeasti. Kun elohopea on täysin haihtunut, se voi saavuttaa normaalin ilmanpaineen 50-70, ja tämä prosessi kestää yleensä noin 5-15 minuuttia. Ultrakorkeapaineisen elohopealampun luminesenssi on seurausta valokvanttien emissiosta elohopeamolekyylien jatkuvan dissosioitumisen ja elektrodien välisen purkautumisen aikana. Se säteilee voimakasta ultravioletti- ja siniviolettivaloa, joka riittää virittämään erilaisia fluoresoivia aineita, joten sitä käytetään laajalti fluoresenssimikroskopiassa.
Ultrakorkeapaineiset elohopealamput säteilevät myös paljon lämpöä. Siksi lamppukotelossa on oltava hyvät lämmönpoistoolosuhteet, eikä työympäristön lämpötila saa olla liian korkea.
Uusi ultrakorkeapaineinen elohopealamppu voidaan sytyttää ilman suurjännitettä käytön alussa. Käytön jälkeen se on käynnistettävä korkealla jännitteellä (noin 15 000 V). Käynnistyksen jälkeen huoltotyöjännite on yleensä 50-60V ja käyttövirta noin 4A. 200 W:n ultrakorkeapaineisen elohopealampun keskimääräinen käyttöikä on noin 200 tuntia, jos sitä käytetään 2 tuntia joka kerta. Mitä lyhyempi työaika, sitä lyhyempi käyttöikä. Jos sitä käytetään vain 20 minuuttia, käyttöikä lyhenee 50 prosenttia. Siksi minimoi käynnistysten määrä, kun käytät sitä. Lampun käytön aikana sen valoteho heikkenee vähitellen. Kun valo on sammunut, odota sen jäähtymistä ennen kuin käynnistät uudelleen. Älä sammuta lamppua heti sen sytytyksen jälkeen, jotta elektrodi ei vaurioidu epätäydellisen elohopean haihtumisen vuoksi. Yleensä sen on odotettava 15 minuuttia. Ultrakorkeapaineisen elohopealampun korkean paineen ja voimakkaiden ultraviolettisäteiden vuoksi polttimo on asetettava lampun kammioon ennen kuin se voidaan sytyttää, jotta se ei vahingoita silmiä ja aiheuta toimintaa räjähdyksen sattuessa. .
Ultrakorkeapaineisen elohopealampun (100W tai 200W) valonlähteen piiri ja useita osia, mukaan lukien muuntaja, liitäntälaite ja käynnistys. Lamppukammiossa on järjestelmä polttimon valokeskipisteen säätöön. Polttimon taakse on asennettu alumiinipinnoitettu kovera heijastin ja eteen valoa keräävä linssi.
Kotimainen ultrakorkeapaineelohopealamppu GCQ-200 on suorituskykyinen ja sillä voidaan korvata tuontipolttimot, kuten HBO-200. Keskimääräinen käyttöikä on yli 200 tuntia ja hinta suhteellisen alhainen.
Kotimaassani kehitetty yksinkertainen ja kannettava korkean värilämpötilan bromivolframi fluoresoiva valonlähdelaite on pienikokoinen, kevyt, pienitehoinen, kaksikäyttöinen AC ja DC (tasavirtalähteellä), helppo kuljettaa mukana, helppokäyttöinen ja siinä on popularisoitu ja sovellettu.
(2) Värisuodatinjärjestelmä
Värisuodatinjärjestelmä on tärkeä osa fluoresenssimikroskooppia, joka koostuu virityssuodatinlevystä ja puristussuodatinlevystä. Suodatinlevyn malli ja kunkin valmistajan nimi eivät usein ole yhtenäisiä. Suodatinlevyt on yleensä nimetty perusvärin mukaan, edessä olevat kirjaimet edustavat väriä, kirjaimet takana edustavat lasia ja numerot edustavat mallin ominaisuuksia. olympus-mikroskooppi
(3) Objektiivi
Erilaisia objektiivilinssejä voidaan käyttää, mutta akromaattisia objektiivilinssejä käytetään, koska niiden autofluoresenssi on minimaalinen ja niiden valonläpäisyominaisuudet (aallonpituusalue) sopivat fluoresenssiin. Koska kuvan fluoresenssikirkkaus mikroskoopin näkökentässä on verrannollinen objektiivin aukkosuhteen neliöön ja kääntäen verrannollinen sen suurennukseen, fluoresenssikuvan kirkkauden parantamiseksi objektiivilinssillä on suuri aukkosuhdetta tulee käyttää. Varsinkin suurella suurennuksella sen vaikutus on hyvin ilmeinen. Siksi näytteille, joiden fluoresenssi on riittämätön, objektiivilinssiä, jolla on suuri aukkosuhde, tulee käyttää mahdollisimman pienellä okulaarilla (4×, 5×, 6,3× jne.).
(4) Peili
Heijastimen heijastava kerros on yleensä alumiinipinnoitettu, koska alumiini absorboi vähemmän ultraviolettivalon ja näkyvän valon siniviolettialueella ja heijastus on yli 90 prosenttia, kun taas hopean heijastus on vain 70 prosenttia. Yleensä käytetään litteää heijastinta.
(5) Lauhdutin
Fluoresenssimikroskopiaan suunnitellut kondensaattorit on valmistettu kvartsilasista tai muusta UV-läpäisevästä lasista. Selkeän kentän lauhduttimia ja pimeän kentän lauhduttimia on kahta tyyppiä. On myös faasikontrastifluoresenssikeskittimiä.
(6) Epi-light-laite
Uuden tyyppinen epi-light laite on se, että kun valonlähteen valo osuu interferenssispektroskooppiseen suodattimeen, lyhyen aallonpituuden osa (ultravioletti ja purppuransininen) heijastuu suodattimen pinnoitteen ominaisuuksien vuoksi. Kun suodatin on valonlähdettä päin, kulma on 45. Kun se on kallistettu, se ampuu objektiiviin pystysuunnassa ja ampuu näytteeseen objektiivin läpi niin, että näyte on jännittynyt. Tällä hetkellä objektiivi toimii suoraan valonkerääjänä. Samanaikaisesti suodattimen pitkä osa (vihreä, keltainen, punainen jne.) on suodattimelle läpinäkyvä, joten se ei heijastu objektiivilinssin suuntaan ja suodatin toimii virityssuodatinlevynä, koska näytteen fluoresenssi on näkyvän valon pitkän aallonpituuden alueella, voi kulkea suodattimen läpi ja saavuttaa okulaarin havainnointia varten, fluoresoivan kuvan kirkkaus kasvaa suurennuksen kasvaessa ja on voimakkaampaa kuin läpäisevä valo lähde suurella suurennuksella. Läpäisevän valonlähteen toiminnon lisäksi se soveltuu paremmin läpikuultavien ja läpikuultavien näytteiden, kuten paksujen viipaleiden, suodatinkalvojen, pesäkkeiden ja kudosviljelynäytteiden, suoraan tarkkailuun. Viime vuosina kehitetyissä uusissa fluoresenssimikroskoopeissa käytetään enimmäkseen epi-light-laitteita, joita kutsutaan epifluoresenssimikroskooppeiksi.
