Stereofluoresenssimikroskoopin käyttö ja varotoimet
Ohjeet:
(1) Aseta materiaaliarkki lavalle.
(2) Kytke fluoresoivan mikroskoopin jännitteen stabilisaattori päälle. Paina sitten käynnistysryhmää UV-lampun sytyttämiseksi, äläkä sammuta sitä 15 minuutin kuluessa, äläkä käynnistä sitä uudelleen 3 minuutin sisällä sen sammuttamisen jälkeen.
(3) Käännä virityssuodatin asentoon v, värierotussuodatin asentoon v ja valitse 495 tai 475 nm estävä suodatin.
(4) Valitse mikroskooppiseen tutkimukseen fluoresoiva objektiivimikroskooppi uvFL40, uvFL100.
(5) Lisää objektilasille ei-fluoresoivaa öljyä, käytä ensin 40 x ja käytä sitten 100 x tarkennusmikroskooppia tarkistaaksesi. Fluoresenssi näkyy.
(7) Koska fluoresoivien aineiden fluoresenssi heikkenee vähitellen ajan myötä, kun niitä säteilytetään ultraviolettivalolla, näkökenttää olisi vaihdettava usein mikroskooppisen tutkimuksen aikana.
(8) uvFL10- tai uvFL20-vähäsuurennusmikroskooppeja voidaan käyttää myös materiaalien tarkastamiseen (fluoresoivaa öljyä ei lisätä käytettäessä pienitehoisia linssejä).
Fluoresenssikuvan tallennusmenetelmä:
Fluoresenssimikroskoopilla näkemällä fluoresenssikuvalla on sekä morfologisia ominaisuuksia että fluoresenssiväriä ja -kirkkautta. Tuloksia arvioitaessa nämä kaksi on yhdistettävä kokonaisvaltaisen arvioinnin saamiseksi. Tulokset kirjataan subjektiivisten indikaattoreiden eli työntekijöiden visuaalisen havainnoinnin perusteella. Yleisenä laadullisena havainnona periaatteessa luotettava. Tekniikan ja tieteen kehittyessä käytetään objektiivisia indikaattoreita eriasteisten arviointitulosten tallentamiseen, kuten soluspektrofotometrit, kuva-analysaattorit ja muut instrumentit. Näillä instrumenteilla kirjatut tulokset on kuitenkin yhdistettävä subjektiivisiin arvioihin.
Fluoresenssimikroskooppikuvaus on erittäin tarpeellista fluoresenssikuvien tallentamiseen. Koska fluoresenssi on helppo häivyttää ja heikentää, tulokset on tallennettava reaaliajassa. Menetelmä on periaatteessa sama kuin tavallisessa mikrokuvauksessa. Sinun tarvitsee vain käyttää nopeaa valoherkkää filmiä, kuten ASA200 tai uudempi tai 24. uudempi. Koska ultraviolettivalolla on voimakas vaikutus fluoresenssin sammutukseen, kuten FITC-markkereihin, fluoresenssin kirkkaus laskee 50 prosenttia, kun sitä säteilytetään ultraviolettivalolla 30 sekunnin ajan. Siksi fluoresoivaa kuvaa ei voida ottaa, jos valotusnopeus on liian hidas. Yleistutkimuksen fluoresenssimikroskoopeissa on puoliautomaattiset tai täysin automaattiset mikrografiajärjestelmälaitteet.
Varotoimenpiteet:
(1) Käytä tiukasti fluoresenssimikroskoopin tehtaan ohjeiden mukaisesti, äläkä muuta ohjelmaa mielesi mukaan.
(2) Tarkastus on suoritettava pimeässä huoneessa. Kun olet saapunut pimeään, kytke virtalähde ja sytytä ultrakorkeapaineinen elohopealamppu 5-15 minuuttia. Kun valonlähteen voimakas valo on vakaa, silmät sopeutuvat täysin pimeään huoneeseen ja alkavat sitten tarkkailla näytettä.
(3) Jotta ultraviolettisäteet eivät vahingoittaisi silmiä, valonlähdettä säädettäessä tulee käyttää suojalaseja.
(4) Tarkastusaika on mieluiten 1-2 tuntia joka kerta. Jos se ylittää 90 minuuttia, ultrakorkeapaineisen elohopealampun valovoima vähenee vähitellen ja fluoresenssi heikkenee; sen jälkeen kun näytettä on säteilytetty ultraviolettisäteillä 3-5 minuuttia, myös fluoresenssi heikkenee merkittävästi; siksi se ei saa ylittää enintään 2-2 tuntia. 3h.
(5) Fluoresenssimikroskoopin valonlähteen käyttöikä on rajoitettu, ja näytteet on tarkastettava yhdessä ajan säästämiseksi ja valonlähteen suojaamiseksi. Kuumalla säällä tulisi lisätä tuulettimia lämmön haihduttamiseksi ja uudet polttimot kirjata muistiin niiden käyttöajan alusta. Kun haluat käyttää sitä uudelleen sen jälkeen, kun lamppu on sammunut, sinun on odotettava, kunnes lamppu on jäähtynyt riittävästi, ennen kuin sytytät sen. Vältä valonlähteen sytyttämistä useita kertoja päivässä.
(6) Tarkkaile näytettä välittömästi värjäyksen jälkeen, sillä fluoresenssi heikkenee vähitellen ajan myötä. Jos näytettä säilytetään polyetyleenimuovipussissa 4 asteen lämpötilassa, fluoresenssin heikkenemisaika voi viivästyä ja kiinnitysaineen haihtuminen voidaan estää.
(7) Fluoresenssin kirkkauden arviointistandardi: se on yleensä jaettu neljään tasoon, eli "yksi" - fluoresenssia ei näy tai se on heikko. " plus "—Vain selvästi näkyvä fluoresenssi näkyy. " plus plus "— Näkyvä ja kirkas
