Vaatimukset fluoresoivien mikroskooppien tuotantoa varten
(1) Lasiliukumäki
Luistin paksuuden tulee olla 0,8–1,2 mm. Jos objektilasi on liian paksu, se toisaalta imee enemmän valoa, toisaalta se ei voi saada herätevaloa kerääntymään näytteeseen. Objektiivin on oltava sileä, tasapaksuinen ja vailla ilmeistä spontaania fluoresenssia. Joskus tarvitaan kvartsilasilevyjä.
(2) Peitä lasilevy
Peitelasin paksuus on noin 0,17 mm, mikä on sileä ja puhdas. Herätyksen tehostamiseksi voidaan käyttää myös häiriösuojalasia. Tämä on erityisesti suunniteltu kansilasi, jossa on useita ainekerroksia (kuten magnesiumfluoridia), joilla on erilaisia häiriövaikutuksia eri valon aallonpituuksilla. Se voi sallia fluoresenssin kulkea tasaisesti, kun taas heijastusviritys voi virittää näytettä.
(3) Näyte
Kudosviipaleet tai muut näytteet eivät saa olla liian paksuja, koska viritysvalo kuluu enimmäkseen näytteen alaosassa, kun taas objektiivilinssin suoraan havaitsema yläosa ei ole täysin virittynyt. Lisäksi solujen päällekkäisyys tai epäpuhtauksien peittäminen voi vaikuttaa harkintaan.
(4) Tiivistysaine
Glyseriiniä käytetään yleisesti kiinnitysaineena, ja sen on oltava vapaa spontaanista fluoresenssista, väritön ja läpinäkyvä. Fluoresenssin kirkkaus on kirkkaampi pH:ssa 8,5-9,5, eikä se ole helppo haalistua nopeasti. Siksi tiivistysaineena käytetään yleisesti yhtä suurta seosta glyserolia ja 0,5 mol/l karbonaattipuskuria pH:ssa 9.0-9,5.
(5) Peiliöljy
Tarkasteltaessa näytteitä tummakentän fluoresenssimikroskoopilla ja öljymikroskoopilla on käytettävä linssiöljyä. On parasta käyttää erityisesti valmistettua ei-fluoresoivaa linssiöljyä, joka voidaan myös korvata glyserolilla, kuten edellä mainittiin. Myös nestemäistä parafiinia voidaan käyttää, mutta taitekerroin on alhainen ja sillä on pieni vaikutus kuvanlaatuun.
Varotoimet fluoresenssimikroskoopin käyttöä varten
(1) Noudata tiukasti fluoresenssimikroskoopin tehtaan manuaalisia vaatimuksia äläkä muuta ohjelmaa mielivaltaisesti.
(2) Tarkastus on suoritettava pimeässä huoneessa. Kun olet saapunut pimeään, kytke virtalähde ja sytytä ultrakorkeapaineinen elohopealamppu 5–15 minuutin ajan. Kun valonlähde lähettää voimakasta valoa ja stabiloituu, silmät sopeutuvat täysin pimeään ennen näytteen tarkkailua.
(3) Jotta vältetään silmien UV-vauriot, on käytettävä suojalaseja säädettäessä valonlähdettä.
(4) Tarkastusajan tulee olla 1-2 tuntia joka kerta. Jos se ylittää 90 minuuttia, ultrakorkeapaineisen elohopealampun valovoima vähenee vähitellen ja fluoresenssi heikkenee; Altistettuaan ultraviolettisäteilylle 3-5 minuuttia, myös näytteen fluoresenssi laski merkittävästi; Joten se ei saa ylittää enintään 2-3 tuntia.
(5) Fluoresoivan mikroskoopin valonlähteen käyttöikä on rajoitettu, ja näyte on tarkastettava keskitetysti ajan säästämiseksi ja valonlähteen suojaamiseksi. Kun sää on kuuma, sähkötuuletin tulisi lisätä lämmön haihduttamiseksi ja jäähdyttämiseksi. Uutta hehkulamppua vaihdettaessa käyttöaika tulee kirjata alusta alkaen. Kun lamppu sammutetaan ja sitä halutaan käyttää uudelleen, sen on odotettava polttimon jäähtymistä täysin ennen kuin se sytytetään. Vältä valonlähteen sytytystä useaan kertaan.
(6) Tarkkaile näytettä välittömästi värjäyksen jälkeen, koska fluoresenssi vähenee vähitellen ajan myötä. Jos näytettä säilytetään polyetyleenimuovipussissa 4 asteen lämpötilassa, se voi viivyttää fluoresenssin vaimennusaikaa ja estää kiinnitysaineen haihtumisen.
(7) Fluoresenssin kirkkauden arviointistandardi on yleensä jaettu neljään tasoon, nimittäin "yksi" - ei fluoresenssia tai näkyy heikko fluoresenssi. plus - Vain selvästi näkyvä fluoresenssi näkyy. plus plus - Näkyy kirkkaalla fluoresenssilla. ' plus plus plus ' - Näkyvä ja häikäisevä fluoresenssi.
