Vaatimukset rutiininäytteiden valmistelulle mikroskopiaa varten
Konfokaalimikroskooppi on 1980-luvulla kehitetty käänteentekevä korkean teknologian uusi tuote, ja se on yksi tärkeimmistä analyyttisistä instrumenteista molekyylibiologiassa ja biotieteessä nykyään. Konfokaalimikroskopia perustuu fluoresenssimikroskooppikuvaukseen, johon on lisätty laserskannauslaite, tietokoneen avulla kuvankäsittelyyn fluoresoivien kuvien saamiseksi solujen tai kudosten sisällä olevasta mikrorakenteesta sekä monien fysiologisten signaalikoneiden morfologian muutosten tarkkailuun solunvälisellä tasolla. Ryhdy tehokkaaksi tutkimustyökaluksi morfologian, molekyylisolubiologian, neurotieteen, farmakologian, genetiikan ja muiden tieteenalojen aloilla.
Näytteen valmistelu konfokaalimikroskopiaa varten on kriittinen vaihe ennen havaitsemista. Näytteet on leimattava fluoresoivilla koettimilla (yksittäinen, kaksois-, kolminkertainen).
sitä
Näytteet voivat olla kiinteitä tai eläviä kudoksia tai kiinnittyneitä tai eläviä kiinnittyviä viljelmiä. Soluja tulee viljellä Confocalin erityisillä pienillä viljelymaljoilla tai kansilaseilla. Ripusta soluja, ravista tai pudota viipaleita ja peitä peitekalvolla. Näytteen Zda-paksuus on noin 1–2 mm, käytetyn peitelasin paksuuden tulee olla alle 0,17 mm ja liukulasin paksuuden välillä 0,8–1,2 mm, ja pinta on sileä, paksuus on tasainen, eikä siinä ole ilmeistä häiriöfluoresenssia. Kiinnitysväliainetta käytetään usein kiinteisiin näytteisiin, ja asennukseen käytetään yleisesti PBS:ssä valmistettua glyserolia, jonka pH on 8.5-9.
Rutiininäytteen valmistusvaatimukset:
1. Väriaineiden valinta
Koska konfokaalimikroskooppi käyttää valonlähteenä yhden aallonpituuden laseria, fluoresoivien väriaineiden valinnan tulee perustua konfokaalimikroskoopilla varustetun laserin aallonpituuteen. Jos samassa näytteessä on useita fluoresoivia väriaineita, myös niiden emissioaallonpituus tulee huomioida mahdollisimman tarkasti. Älä mene päällekkäin, jotta vältyt ristikkäisväriongelmien välttämiseksi.
2. Näytteen kantajan valinta
Konfokaalimikroskoopin suuritehoinen objektiivilinssi on yleensä öljylinssi, sen numeerinen aukko on pieni ja linssin ja näytteen välinen työetäisyys ei saa olla yli 0,17 mm. Diat ja peitelasit ovat kunnossa. Jos se on suspendoituneita soluja tai suspendoituneita hiukkasia, konfokaalimikroskoopille tarkoitettua petrimaljaa voidaan käyttää näytteen kuljettamiseen tarkkailua varten.
3. Asennusaineen valinta
Jos näytettä tarvitsee tarkkailla vain kerran ja fluoresenssi ei vaimene helposti, voit valita tietyn konsentraation glyseroliseosta levyn sulkemiseksi. Jos näyte on asetettava tietyksi ajaksi ja otettava useita kertoja, on valittava antifluoresenssisammuttava asennusväliaine fluoresoivien signaalien häviämisen vähentämiseksi.
