Mikrobiologinen mikroskoopin suora laskenta
Kokeellinen periaate
Suora laskenta mikroskoopilla hemosytometrillä on yleisesti käytetty mikrobien laskentamenetelmä. Tämän menetelmän etuna on, että se on intuitiivinen ja nopea. Aseta asianmukaisesti laimennettu bakteerisuspensio (tai itiösuspensio) hemosytometrin objektilasin ja kansilasin väliin olevaan laskentakammioon ja laske mikroskoopin alla. Koska laskentakammion tilavuus on kiinteä (0,1 mm2), se voidaan muuntaa mikro-organismien kokonaismääräksi tilavuusyksikköä kohti mikroskoopilla havaittujen mikro-organismien lukumäärän mukaan. Koska tämä menetelmä laskee elävien ja kuolleiden bakteerien summan, sitä kutsutaan myös bakteerien kokonaislaskentamenetelmäksi.
Hemosytometri on yleensä erityinen lasilevy, jossa neljä uraa muodostaa kolme alustaa. Keskellä oleva taso on jaettu kahteen puolikkaaseen lyhyellä vaakasuoralla uralla. Lavan molemmille puolille on kaiverrettu ristikko. Jokainen ruudukko on jaettu yhdeksään suureen neliöön. Suuri neliö keskellä on laskentahuone. Mikro-organismit lasketaan laskentakammiossa.
Laskentahuoneen mittakaavassa on yleensä kaksi eritelmää, joista yksi on, että suuri neliö on jaettu 16 keskiruutuun ja jokainen keskimmäinen neliö on jaettu 25 pieneen neliöön (kuva Ⅷ-2); toinen on iso neliö Neliö on jaettu 25 keskimmäiseen neliöön ja jokainen keskimmäinen neliö on jaettu 16 pieneen neliöön (kuva Ⅷ-1, C). Mutta riippumatta siitä, millainen laskulauta on, pienten ruutujen määrä jokaisessa suuressa ruudussa on sama, eli 16×25=400 pientä neliötä.
Jokaisen suuren neliön sivun pituus on 1 mm ja kunkin suuren neliön pinta-ala on 1 mm2. Kun kansilasi on peitetty, liukulasin ja kansilasin välinen korkeus on 0,1 mm, joten laskentakammion tilavuus on 0,1 mm3.
Laskettaessa yleensä lasketaan bakteerien kokonaismäärä viidessä keskimmäisessä neliössä, lasketaan sitten kunkin keskimmäisen neliön keskiarvo ja kerrotaan sitten 16:lla tai 25:llä saadaksesi bakteerien kokonaismäärä suuressa neliössä, ja muunnetaan sitten bakteerien kokonaismäärä 1 ml:ssa bakteeriliuosta.
Laboratoriolaitteet
Hemosytometri, mikroskooppi, peitinlasi, steriili kapillaari;
Kokeelliset materiaalit
Saccharomyces cerevisiae -suspensio
Kokeellinen menettely (mikrobimikroskoopin suoralaskentamenetelmä)
1. laimennus
Laimenna Saccharomyces cerevisiae -suspensio oikein. Jos bakteeriliuos ei ole paksua, sitä ei tarvitse laimentaa.
2. Mikroskooppinen laskentahuone
Ennen kuin lisäät näytteitä, suorita mikroskooppinen tarkastus laskentalevyn laskentakammioon. Jos siinä on likaa, se on puhdistettava ennen laskemista.
3. lisää näyte
Peitä puhdas ja kuiva hemosytometrilevy kansilasilla ja tiputa sitten pieni pisara laimennettua Saccharomyces cerevisiae -liuosta kansilasin reunalta steriilillä kapeasuisella tiputtimella (ei liikaa), jotta bakteeriliuos on lähellä rakoa rakoa pitkin. Kapillaariosmoosi tulee laskentakammioon itsestään ja yleinen laskentakammio voidaan täyttää bakteerinesteellä. Varo, ettei siinä ole ilmakuplia.
4. mikroskoopin määrä
5 minuutin levon jälkeen aseta hemosytometri mikroskoopin tasolle, käytä ensin pienitehoista linssiä laskentakammion sijainnin löytämiseen ja vaihda sitten suurtehoiseen linssiin laskentaa varten. Jos havaitaan, että bakteeriliuos on liian paksu tai liian ohut ennen laskemista, laimennus on säädettävä uudelleen ennen laskemista. Yleinen näytteen laimennus vaatii noin
5-10 solua ovat sopivia. Jokainen laskentakammio valitsee bakteerit viidestä keskiruudukosta (valinnainen 4 kulmaa ja keskiritilä) laskemista varten. Ristikkoviivalla olevat bakteerit lasketaan yleensä vain ylä- ja oikealle riville. Hiivan orastuessa, kun silmurungon koko saavuttaa puolet emosolusta, laske kaksi bakteeria. Laske näyte laskeaksesi näytteen bakteeripitoisuuden kahdessa laskentakammiossa lasketuista arvoista.
5. Hemosytometrin puhdistaminen
Käytön jälkeen huuhtele hanassa oleva verisolulaskentalevy vesisuihkuilla, älä pese sitä kovilla esineillä ja kuivaa se itse tai hiustenkuivaajalla pesun jälkeen. Mikroskooppinen tutkimus, tarkkaile, onko kussakin solussa jäljellä bakteereja tai muita sedimenttejä. Jos se ei ole puhdas, se on pestävä toistuvasti, kunnes se on puhdas.
