Johdatus monifotonilaserpyyhkäisymikroskopian etuihin ja haittoihin
1. Kun käytetään punaista valoa tai infrapunavaloa virittämiseen, valon sironta on pieni ja pienten hiukkasten sironta on kääntäen verrannollinen aallonpituuden neljänteen potenssiin.
2. Kuvauspoikkileikkauksesta voidaan kerätä lisää hajaantuneita fotoneja ilman reikiä.
3. Neulanreikä ei pysty erottamaan hajaantuneita fotoneja, jotka lähtevät defokusoidulta alueelta tai tarkennusalueelta, ja monifotonikuvauksen signaali-kohinasuhde syvissä kerroksissa on hyvä.
4. Yksifotoniviritteeseen käytetty ultraviolettivalo tai näkyvä valo absorboituu ja vaimenee helposti näytteeseen ennen kuin säde saavuttaa polttotason, ja syviä kerroksia on vaikea herättää.
5. Biologisen mikroskoopin havainnoinnin kannalta tärkeintä on olla vahingoittamatta itse organismin aktiivista tilaa ja ylläpitää veden virtausta, ionipitoisuutta, happea ja ravinteita. Valon havainnoinnin tapauksessa sekä lämpö- että fotonienergian tulee pysyä säteilymäärän ja valoenergian sisällä, jotta solut eivät vaurioidu.
6. Monifotonimikroskoopilla on monia etuja. Kuten kolmiulotteisella resoluutiolla, tunkeutumissyvyydellä, sirontatehokkuudella, taustavalolla, signaali-kohinasuhteella, ohjauksella jne., kaikilla on ominaisuuksia, joita aiemmilla lasermikroskoopeilla ei ollut tai joita ei voitu verrata.
Monifotonisen laserpyyhkäisymikroskopian haitat:
1. Se voi kuvata vain fluoresenssia.
2. Jos näyte sisältää kromoforeja, jotka absorboivat viritysvaloa, näyte voi vaurioitua lämpövaurioita.
3. Tarkkuus on hieman pienempi. Vaikka sitä voidaan parantaa käyttämällä samanaikaisia konfokaalisia reikiä, signaali häviää.
4. Kallien ultranopeiden lasereiden rajoittamana monifotonipyyhkäisymikroskooppien kustannukset ovat suhteellisen korkeat.
