Kirkkaan{0}}- ja tumman-kentän kuvantamismenetelmät fluoresenssimikroskopiassa
(1) BFI-menetelmä (Bright field imaging), joka sallii vain paraksiaalisella alueella lähetetyn elektronisuihkun kulkea objektiivin aukon läpi muodostaen tumman kuvan kirkkaalle taustalle. Mitä pienempi objektiivin aukko on, sitä suurempi on kirkkaan kuvan kontrasti; (2) Dark field imaging (DFI) on tekniikka, joka sallii vain osan suuren kulman sironneesta säteestä tai tietyn kiteen diffraktiosäteen kulkea objektiivin aukon läpi samalla, kun se estää lähetetyn säteen. Tämä muodostaa kirkkaan graafisen kuvan tummalla taustalla. Tämä tummakenttäkuvausmenetelmä voi parantaa kuvien kontrastia ja on tärkeä kuvantamistekniikka.
Tumman kentän kuvien saamiseksi Leican fluoresenssimikroskoopeilla on karkeasti neljä menetelmää: (1) pystysuoran valaistuksen ylläpitäminen optisella akselilla samalla kun objektiivin aukkoa liikutetaan; (2) Vinovalaistuksen käyttöä hajallaan olevien säteiden sieppaamiseen optisen akselin suunnassa kutsutaan Central Dark Field Imagingiksi (CDFI). (3) Objektiivin aukko, jossa on keskisäteen pysäytin ja pyöreä läpinäkyvä alue; (4) Käytä pyöreää läpinäkyvää kondensaattorilinssiä valon tunnistamiseen ja keskimmäistä pyöreää aukkoa objektiivin linssissä. Tässä oleva *-menetelmä on yksinkertaisin, mutta se käyttää elektronista kuvantamista distaalisella holkin alueella, joten aberraatio on suuri ja kuvanlaatu ei ole kovin hyvä. Toisella menetelmällä voidaan välttää edellä mainitut haitat, mutta Leica-fluoresenssimikroskoopin objektiiviaukko vastaanottaa vain pienen osan sironneita diffraktioituja elektroneja, mikä johtaa alhaisempaan hyötysuhteeseen. Aukon sivuun kohdistuu usein suuri määrä elektronipommituksia, mikä voi helposti aiheuttaa epäsymmetristä kontaminaatiota ja vaikuttaa kuvanlaatuun. Rengasmaista objektiivilinssiä on paranneltu tässä suhteessa, mutta haittana on, että sitä on vaikea valmistaa ja on vaikea saavuttaa täydellistä aksiaalista symmetriaa. Ottaen huomioon valaistusjärjestelmän suhteellisen kevyet vaatimukset, voidaan käyttää jälkimmäistä ratkaisua, joka sisältää rengasmaisen aukon lisäämisen lauhduttimeen onton säteen valaistuksen aikaansaamiseksi näytteelle. Tämän laitteen vaikutus. Sen kuvan tarkkuus voi olla lähellä kirkkaiden kenttäkuvien resoluutiota, kun taas kontrasti paranee huomattavasti.
