Fluoresenssimikroskopian tekniset parametrit Fluoresenssimikroskopian tekniikat ja menetelmät
Fluoresenssimikroskoopin tekniset parametrit 1. Laajakulmainen okulaari 2. Akromaattinen objektiivilinssi 3. Nelireikäinen objektiivimuunnin 4. Epi-fluoresoiva laite Sininen (B) Vihreä (G) viritysjärjestelmä 100W elohopealamppu 5. Koaksiaalinen karkean ja hienon tarkennuksen säätömekanismi: säätö Tarkennusalue: 15 mm Mikroliikeruudukon arvo: 0,002 mm 6. Kaksikerroksinen mekaaninen pöytä Pituussuuntainen liikealue: 70 mm Sivusuuntainen liikealue: 50 mm
Fluoresenssimikroskoopin tekniset parametrit
1. Laajakulmainen okulaari
2. Akromaattinen objektiivi
3. Neljän aukon suukappale
4. Epi-fluoresenssilaite sininen (B) vihreä (G) viritysjärjestelmä 100W elohopealamppu
5. Koaksiaalinen karkean ja hienon tarkennuksen säätömekanismi: tarkennusalue 15 mm hieno liikeruudukon arvo 0,002 mm
6. Kaksikerroksinen mekaaninen työpöytä
Pystysuuntainen liikealue: 70 mm Sivusuuntainen liikealue: 50 mm
Fluoresenssimikroskopian taidot ja menetelmät
(1) Lasilasi
Lasilevyn paksuuden tulee olla 0,8–1,2 mm. Liian paksu objektilasi imee toisaalta enemmän valoa, toisaalta viritysvaloa ei voida keskittyä näytteeseen. Diojen on oltava sileitä, tasapaksuisia ja vailla ilmeistä autofluoresenssia. Joskus käytetään kvartsilasilevyjä.
(2) Peitelasi
Peitelasin paksuus on noin 0,17 mm, sileä. Viritysvalon vahvistamiseksi voidaan käyttää myös häiriöpeitelasia, joka on erityinen peitelasi, joka on päällystetty useilla ainekerroksilla (kuten magnesiumfluoridilla), joilla on erilaisia häiriövaikutuksia eri aallonpituuksille valolle, mikä voi tehdä fluoresenssi sujuu ongelmitta. Jännittävä valo kulkee läpi ja heijastuu, ja tämä heijastunut viritysvalo kiihottaa näytettä.
(3) Näyte
Kudosviipaleet tai muut näytteet eivät saa olla liian paksuja. Jos se on liian paksu, suurin osa viritysvalosta kuluu näytteen alaosassa, kun taas objektiivin linssin suoraan havaitsema yläosa ei ole täysin virittynyt. Lisäksi solujen päällekkäisyys tai epäpuhtauspeite vaikuttavat arvioon.
(4) Asennusaine
Glyseriiniä käytetään yleisesti kiinnitysaineena, joka ei saa olla autofluoresenssia, väritöntä ja läpinäkyvää, ja fluoresenssin kirkkaus on kirkkaampi pH:ssa 8.{1}}.5, eikä se ole helppo haalistua nopeasti. Sen vuoksi kiinnitysaineena käytetään yleisesti yhtä suurta seosta glyserolia ja 0,5 mol/l karbonaattipuskuriliuosta, jonka pH on 9.0 - 9,5.
(5) peiliöljy
Yleensä, kun tarkastellaan näytteitä tummakentän fluoresenssimikroskoopeilla ja öljyimmersio-immersiolinsseillä, on käytettävä immersioöljyä. On parasta käyttää erityistä ei-fluoresoivaa immersioöljyä. Sen sijaan voidaan käyttää myös yllä olevaa glyseriiniä ja myös nestemäistä parafiinia, mutta taitekerroin on alhainen, mikä vaikuttaa hieman kuvanlaatuun. Vaikutus.
Fluoresenssimikroskoopin periaate ja rakenteelliset ominaisuudet
Fluoresenssimikroskopia käyttää pistettä, jolla on korkea valotehokkuus, lähettämään tietyn aallonpituuden valoa (kuten ultraviolettivaloa 3650 tuumaa tai violettia sinistä valoa 4200 tuumaa) suodatinjärjestelmän läpi viritysvalona näytteessä olevien fluoresoivien aineiden virittämiseksi lähettämään fluoresenssia eri värejä Tarkkaile sen jälkeen objektiivin ja okulaarin suurennuksen kautta. Tällä tavalla voimakkaan kontrastitaustan alla, vaikka fluoresenssi on erittäin heikko, se on helppo tunnistaa ja sen herkkyys on korkea. Sitä käytetään pääasiassa solurakenteen ja toiminnan sekä kemiallisen koostumuksen tutkimukseen. Fluoresenssimikroskoopin perusrakenne koostuu tavallisesta optisesta mikroskoopista sekä eräistä lisävarusteista (kuten fluoresoiva valonlähde, virityssuodatin, kaksivärinen säteen jakaja ja estosuodatin jne.). Fluoresoiva valonlähde – käytetään yleensä ultrakorkeapaineista elohopealamppua (50-200W), joka voi lähettää valoa eri aallonpituuksilla, mutta jokaisella fluoresoivalla aineella on voimakkaimman fluoresenssin tuottava viritysaallonpituus, joten virityssuodatin ( Yleensä on ultravioletti-, purppura-, sininen ja vihreä virityssuodattimet), jotka päästävät vain tietyn aallonpituuden omaavan viritysvalon kulkemaan läpi ja säteilyttävät näytteen samalla, kun ne absorboivat muuta valoa. Kun kutakin ainetta on säteilytetty viritysvalolla, se emittoi näkyvää fluoresenssia pidemmällä aallonpituudella kuin säteilytyksen aallonpituus hyvin lyhyessä ajassa. Fluoresenssi on spesifistä ja yleensä viritysvaloa heikompaa. Tietyn fluoresenssin havaitsemiseksi objektiivin taakse on lisättävä esto (tai vaimennus) ja käytettävä sen yhteydessä.
Ero fluoresenssimikroskoopin ja tavallisen mikroskoopin välillä
1. Valaistusmenetelmä on yleensä episkooppinen, eli valonlähde heijastetaan näytteeseen objektiivin läpi;
2. Valonlähde on ultraviolettivalo, aallonpituus on lyhyempi ja resoluutio suurempi kuin tavallisten mikroskooppien;
3. On olemassa kaksi erityistä suodatinta, valonlähteen edessä olevaa käytetään suodattamaan näkyvää valoa ja okulaarin ja objektiivin välissä olevaa ultraviolettisäteilyä suojaamaan ihmissilmää.
Fluoresenssimikroskooppi on myös eräänlainen optinen mikroskooppi, suurin ero on, että näiden kahden viritysaallonpituus on erilainen. Tämä määrittää eron fluoresenssimikroskoopin ja tavallisen optisen mikroskoopin välillä rakenteen ja käytön suhteen.
Fluoresenssimikroskopia on tärkeä työkalu immunofluoresoivassa sytokemiassa. Se koostuu pääkomponenteista, kuten valonlähteestä, suodatinlevyjärjestelmästä ja optisesta järjestelmästä. Se on käyttää tiettyä valon aallonpituutta näytteen virittämiseksi lähettämään fluoresenssia ja tarkkailla näytteen fluoresenssikuvaa vahvistamalla objektiivilinssiä ja okulaarijärjestelmää.
