Fluoresenssimikroskopian periaatteet ja rakenteelliset ominaisuudet
Fluoresenssimikroskopia on pisteen korkean luminesenssitehokkuuden käyttö suodatuksen kautta värijärjestelmän säteilemään tietyn aallonpituuden valoa (kuten ultravioletti 3650 osaksi tai violetti-sininen 4200 osaksi) viritysvalona, viritys näytteen sisällä oleva fluoresoiva materiaali lähettää useita eri värejä fluoresenssia ja suurennetaan sitten objektiivin ja okulaarien läpi havainnointia varten. Tällä tavalla voimakkaan kontrastin taustalla, vaikka fluoresenssi on erittäin heikko, se on helppo tunnistaa, korkea herkkyys, jota käytetään pääasiassa solun rakenteen ja toiminnan sekä kemiallisen koostumuksen tutkimiseen. Fluoresenssimikroskoopin perusrakenne koostuu tavallisesta optisesta mikroskoopista sekä eräistä lisävarusteista (kuten fluoresenssivalonlähde, virityssuodattimet, kaksivärinen säteen erotin ja estosuodattimet jne.). Fluoresoiva valonlähde - yleisesti käytetty ultrakorkeapaineinen elohopealamppu (50-200W), joka voi lähettää eri aallonpituuksilla valoa, mutta jokaisella fluoresoivalla materiaalilla on voimakkain fluoresenssivirityksen aallonpituus, joten virityssuodattimia on lisättävä (yleensä ultravioletti, violetti, sininen ja vihreä virityssuodatin), niin että vain tietty aallonpituus herätevaloa säteilyttämällä näytteitä, kun taas toinen valo absorboituu. Joten on tarpeen lisätä virityssuodatin (yleensä ultravioletti-, violetti-, sininen ja vihreä virityssuodattimet), jotta vain tietty aallonpituus viritysvaloa näytteen läpi, kun taas muu valo absorboituu. Kun kutakin ainetta säteilytetään viritysvalolla, se emittoi hyvin lyhyessä ajassa näkyvää fluoresenssia, jonka aallonpituus on pitempi kuin säteilytetty valo. Fluoresenssilla on spesifisyys, yleensä viritysvaloa heikompi, jotta spesifisen fluoresenssin havaitseminen edellyttää, että objektiivilinssi on tarpeen lisätä estoa (tai vaimennusta) käytettäväksi.
Fluoresenssimikroskoopin ja tavallisen mikroskoopin ero
1. Valaistusmenetelmä on yleensä putoava, eli valonlähde heijastetaan näytteeseen objektiivin läpi;
2. Valonlähde on ultraviolettivaloa, jolla on lyhyempi aallonpituus ja suurempi erotuskyky kuin tavallisilla mikroskoopeilla;
3. On olemassa kaksi erityistä suodatinta, valonlähteen edessä olevaa käytetään suodattamaan näkyvää valoa ja okulaarin ja objektiivin välissä olevaa ultraviolettivaloa suojaamaan ihmissilmää.
Fluoresenssimikroskooppi on myös eräänlainen optinen mikroskooppi, suurin ero on, että näiden kahden viritysaallonpituudet ovat erilaiset. Tämä määrittää fluoresenssimikroskoopin ja tavallisen optisen mikroskoopin rakenteen ja eri menetelmien käytön.
Fluoresenssimikroskooppi on immunofluoresenssisytokemian perustyökalu. Se koostuu valonlähteestä, suodatinlevyjärjestelmästä ja optisesta järjestelmästä sekä muista tärkeistä komponenteista. Se käyttää tiettyä valon aallonpituutta stimuloimaan näytettä lähettämään fluoresenssia, joka suurennetaan objektiivilinssin ja okulaarijärjestelmän kautta näytteen fluoresenssikuvan tarkkailemiseksi.
