Fluoresenssimikroskopian tunnistusmenetelmä
fluoresenssimikroskooppi
Fluoresenssimikroskopia on immunofluoresenssisytokemian perustyökalu. Se koostuu pääkomponenteista, kuten valonlähteestä, suodatinlevyjärjestelmästä ja optisesta järjestelmästä. Se käyttää tiettyä valon aallonpituutta näytteen virittämiseen ja fluoresenssin lähettämiseen, jota suurennetaan objektiivi- ja okulaarijärjestelmän kautta näytteen fluoresenssikuvan tarkkailemiseksi (kuva 1).
(1) Valonlähde
Nykyään valonlähteenä käytetään yleisesti 200 W:n ultrakorkeapaineista elohopealamppua. Se on valmistettu kvartsilasista, jonka keskellä on pallomainen muoto ja sisällä on tietty määrä elohopeaa. Käytön aikana kahden elektrodin välinen purkaus saa elohopean haihtumaan ja pallon sisällä oleva paine kasvaa nopeasti. Kun elohopea haihtuu kokonaan, se voi saavuttaa 50-70 normaalin ilmanpaineen, mikä kestää yleensä noin 5-15 minuuttia. Ultrakorkeapaineisten elohopealamppujen luminesenssi on seurausta elektrodien välisestä purkauksesta, joka jatkuvasti dissosioituu ja vähentää elohopeamolekyylejä ja emittoi fotoneja. Se säteilee voimakasta ultravioletti- ja siniviolettivaloa, joka riittää virittämään erilaisia fluoresoivia aineita, joten sitä käytetään laajalti fluoresenssimikroskoopeissa.
Varotoimet fluoresenssimikroskoopin käyttöön
(1) Noudata tarkasti fluoresenssimikroskoopin tehtaan ohjeita äläkä muuta ohjelmaa mielivaltaisesti.
(2) Tarkastus on suoritettava pimeässä huoneessa. Kun olet saapunut pimeään, kytke virta ja sytytä ultrakorkeapaineinen elohopealamppu 5-15 minuuttia. Kun valonlähde lähettää voimakasta valoa ja stabiloituu, silmien tulee sopeutua täysin pimeään huoneeseen ennen näytteen tarkkailua.
(3) Jotta vältetään silmien UV-vauriot, on käytettävä suojalaseja säädettäessä valonlähdettä.
(4) Tarkastusajan tulee olla 1-2 tuntia joka kerta. Jos se ylittää 90 minuuttia, ultrakorkeapaineisen elohopealampun valonvoimakkuus laskee vähitellen ja fluoresenssi heikkenee; Näytteet altistettiin ultraviolettisäteilylle 3-5 päivää
Minuutin jälkeen myös fluoresenssi väheni merkittävästi; Joten enimmäiskesto ei saa ylittää 2-3 tuntia.
(5) Fluoresoivan mikroskoopin valonlähteen käyttöikä on rajoitettu, ja näyte tulee tutkia keskitetysti ajan säästämiseksi.
Säästä aikaa ja suojaa valonlähdettä. Kun sää on kuuma, sähkötuuletin tulisi lisätä lämmön haihduttamiseksi ja jäähdyttämiseksi. Uutta hehkulamppua vaihdettaessa käyttöaika tulee kirjata alusta alkaen. Kun valo sammuu ja haluat käyttää sitä uudelleen, sinun on odotettava lampun jäähtymistä riittävästi ennen kuin sytytät sen. Vältä valonlähteen sytyttämistä useita kertoja päivässä.
(6) Tarkkaile näytettä välittömästi värjäyksen jälkeen, sillä fluoresenssi heikkenee vähitellen ajan myötä. Jos näytettä säilytetään polyetyleenimuovipussissa 4 asteen lämpötilassa, se voi viivyttää fluoresenssin vaimennusaikaa ja estää kiinnitysaineen haihtumisen.
(7) Fluoresenssin kirkkauden arviointikriteerit jaetaan yleensä neljään tasoon, nimittäin "yksi" - ei fluoresenssia tai näkyy heikko fluoresenssi. "+" - Vain näkyvä fluoresenssi on näkyvissä. ++- Näkyy kirkkaalla fluoresenssilla. "+++" - Näkyvä ja häikäisevä fluoresenssi.
