Fluoresenssimikroskooppiin liittyvää tietoa
Konfokaalifluoresenssimikroskopian perusperiaate: näytettä säteilytetään pistevalonlähteellä ja polttotasolle muodostuu hyvin rajattu pieni valopiste. koostuu jakajista. Säteenjakaja lähettää fluoresenssin suoraan ilmaisimeen. Valonlähteen ja ilmaisimen edessä on neulanreikä, joita kutsutaan vastaavasti valaistuksen neulanreikiksi ja ilmaisimen reikäksi. Näiden kahden geometrinen koko on sama, noin 100-200nm; polttotason valopisteeseen nähden nämä kaksi ovat konjugoituja, eli valopiste kulkee linssien sarjan läpi ja lopulta voidaan tarkentaa valaistusneulanreikään ja tunnistusneulanreikään samanaikaisesti. Tällä tavalla polttotasosta tuleva valo voidaan konvergoida tunnistusreiän sisällä, kun taas polttotason ylä- tai alapuolelta sironnut valo on estetty tunnistusreiän ulkopuolelle, eikä sitä voida kuvata. Laser skannaa näytteen piste pisteeltä, ja valomonistinputki neulanreiän havaitsemisen jälkeen saa myös vastaavan valopisteen konfokaalisen kuvan piste pisteeltä, joka muunnetaan digitaaliseksi signaaliksi ja lähetetään tietokoneelle ja lopuksi aggregoidaan kirkkaaksi kuvaksi. konfokaalinen kuva koko polttotasosta näytöllä.
Jokainen polttotason kuva on itse asiassa näytteen optinen poikkileikkaus, ja tällä optisella poikkileikkauksella on aina tietty paksuus, joka tunnetaan myös optisena ohuena leikkauksena. Koska valon intensiteetti polttopisteessä on paljon suurempi kuin ei-fokusointipisteessä ja ei-fokusoiva tason valo suodattuu neulanreiällä, konfokaalijärjestelmän syväterävyys on suunnilleen nolla ja skannaus Z-suuntaa pitkin. -akselilla voidaan toteuttaa optinen tomografia, joka muodostaa Tarkkaile kaksiulotteista optista leikkausta näytteen fokusoidussa pisteessä. Yhdistämällä XY-tason (fokusointitaso) skannauksen Z-akselin (optisen akselin) skannaukseen, näytteen kolmiulotteinen kuva voidaan saada keräämällä kaksiulotteisia kuvia jatkuvista kerroksista ja prosessoimalla erityisellä tietokoneohjelmistolla.
Toisin sanoen tunnistusneulanreikä ja valonlähteen neulanreikä on aina fokusoitu samaan pisteeseen, joten polttotason ulkopuolella virittynyt fluoresenssi ei pääse tunnistusreikään.
Laserkonfokaalin toimintaperiaatteen yksinkertainen ilmaus on, että se käyttää laservaloa valonlähteenä. Perinteisen fluoresenssimikroskoopin kuvantamisen pohjalta se lisää laserskannauslaitteen ja konjugaattitarkennuslaitteen ja on järjestelmä digitaalisten kuvien hankintaan ja käsittelyyn tietokoneohjauksella.
