Parantaa laserkeilaavan monifotonimikroskoopin etuja
Laserpyyhkäisy-monifotonimikroskooppi on merkittävä parannus optiseen mikroskopiaan. Se pystyy tarkkailemaan elävien solujen, kiinteiden solujen ja kudosten syvärakennetta ja voi saada selkeitä ja teräviä monikerroksisia Z-tasorakenteita eli optisia leikkeitä, joista se voi rakentaa Näytteen kolmiulotteisen kiinteän rakenteen. Konfokaalimikroskopiassa käytetään laservalonlähdettä, joka laajentamisen jälkeen täyttää objektiivin koko takapolttotason ja kulkee sitten objektiivin linssijärjestelmän läpi suppenemaan hyvin pieneen pisteeseen näytteen polttotasolla. Objektiivin numeerisesta aukosta riippuen kirkkaimman valaistuspisteen halkaisija on noin 0,25 ~ 0,8 μm ja syvyys noin 0,5 ~ 1,5 μm . Konfokaalipisteen koko riippuu mikroskoopin suunnittelusta, laserin aallonpituudesta, objektiivilinssin ominaisuuksista, skannausyksikön tila-asetuksista ja näytteen ominaisuuksista. Kenttämikroskopialla on laaja valaistusalue ja -syvyys, kun taas konfokaalimikroskoopilla on fokusoitu valaistus, joka on fokusoitu polttopisteeseen polttotasolla. Konfokaalimikroskopian perusetu on, että sillä voidaan tehdä paksujen fluoresoivien näytteiden (joka voi olla 50 μm tai enemmän) optista hienoleikkaamista, ja leikkeiden paksuus on noin 0,5-1,5 μm. Sarja optisia leikkauskuvia voidaan saada siirtämällä näytettä ylös ja alas mikroskoopin Z-akselin askelmoottorilla. Kuvatietojen hankintaa ohjataan tasossa, eivätkä näytteen muista kohdista lähetetyt signaalit häiritse sitä. Taustafluoresenssin vaikutuksen poistamisen ja signaali-kohinasuhteen lisäämisen jälkeen konfokaalisten kuvien kontrasti ja resoluutio paranevat merkittävästi verrattuna perinteisiin kenttävalaistettuihin fluoresenssikuviin. Monissa näytteissä monet monimutkaiset rakenneosat kietoutuvat yhteen muodostaen monimutkaisia järjestelmiä, mutta kun optisia osia on kerätty tarpeeksi, voimme rekonstruoida ne kolmiulotteisesti ohjelmiston avulla. Tätä kokeellista menetelmää on käytetty laajasti biologisessa tutkimuksessa solujen tai kudosten välisten monimutkaisten rakenteellisten ja toiminnallisten suhteiden selvittämiseen.
