Mikro-organismien lukumäärän määritys - Mikroskooppinen suora laskentamenetelmä!
Bakteeripopulaation kasvu ilmenee solujen määrän lisääntymisenä tai solumateriaalin lisääntymisenä. Menetelmiä solujen lukumäärän määrittämiseksi ovat suora mikroskooppinen laskenta, levymäärä, sameuden estimointi spektrofotometrillä, todennäköisimmän lukumäärän MPN ja kalvosuodatus. (membraanisuodatus) jne. Soluaineiden mittausmenetelmiä ovat solun kuivapainon määritys, tiettyjen solukomponenttien, kuten typpipitoisuuden, RNA- ja DNA-pitoisuuksien, sekä aineenvaihduntatuotteiden määritys. Lyhyesti sanottuna mikrobikasvun mittaamiseen on monia menetelmiä, joista jokaisella on omat etunsa ja haittansa. Menetelmä tulee valita työn erityisvaatimusten mukaan. Tässä kokeessa esitellään pääasiassa tuotannossa ja tieteellisessä tutkimustyössä yleisesti käytettyä mikroskoopin suoralaskentamenetelmää.
1. Käyttötarkoitusvaatimukset
1. Selvitä laskennan periaate verisolulaskentataululla.
2. Hallitse menetelmä mikro-organismien laskentaan verisolulaskentataululla.
2. Perusperiaatteet
Mikroskoopin suoralaskentamenetelmä on yksinkertainen, nopea ja intuitiivinen menetelmä, joka asettaa pienen määrän testattavaa näytettä suspensiota erityiselle objektilasille, jolla on määrätty pinta-ala ja tilavuus (kutsutaan myös bakteriometriksi) ja laskee sen suoraan mikroskoopin alla. menetelmät. Tällä hetkellä yleisesti käytettyjä bakteriometrejä kotimaassa ja ulkomailla ovat: hemosytometri, Peteroff-Hauser-bakteriometri ja Hawksley-bakteriometri jne. Niitä kaikkia voidaan käyttää hiivan, bakteerien, homeitiöiden ja muiden suspensioiden laskemiseen, ja perusperiaatteet ovat samat. Kahden jälkimmäisen bakteerilaskurin kokonaistilavuus on 0.02 mm3 peitelasilla peittämisen jälkeen, ja kansilasin ja objektilasin välinen etäisyys on vain 0,02 mm. Siksi öljyimmersioobjektiivilla voidaan tarkkailla ja havaita pienempiä soluja, kuten bakteereja. Kreivi. Näiden bakteriometrien lisäksi käytössä on myös estimointimenetelmä, joka tarkkailee suoraan mikroskoopin alla sivelyalueen suhdetta näkökenttäalueeseen. Tätä menetelmää käytetään yleensä maidon bakteriologiseen tutkimukseen. Mikroskoopin suoran laskentamenetelmän etuna on, että se on intuitiivinen, nopea ja helppokäyttöinen. Tämän menetelmän haittana on kuitenkin se, että mitattu tulos on yleensä kuolleiden ja elävien bakteerien summa. Tällä hetkellä on olemassa joitakin menetelmiä tämän puutteen poistamiseksi, kuten elävien bakteerien yhdistäminen, joka värjää mikrokammioviljelmää (lyhyt aika) ja solunjakautumisen estäjien lisääminen, jotta saavutetaan tarkoitus laskea vain eläviä bakteereja.
Tässä kokeessa käytetään hemosytometriä esimerkkinä suorien laskennan suorittamiseksi mikroskoopilla. Katso kahden muun bakteriometrin käyttö kunkin valmistajan ohjeista. Suora laskenta mikroskoopilla hemosytometrillä on yleisesti käytetty mikrobien laskentamenetelmä. Laskentalauta on erityinen liukumäki, jossa on neljä uraa, jotka muodostavat kolme alustaa; keskellä oleva leveämpi taso on jaettu kahteen puolikkaaseen lyhyellä vaakasuoralla uralla ja lavan molemmilla puolilla on ristikko. Jokainen neliöruudukko on jaettu yhdeksään suureen neliöön, ja keskellä oleva suuri neliö on laskentahuone. Verisolulaskentataulun rakenne on esitetty kuvassa {{0}}. Laskentakammion asteikolla on yleensä kaksi eritelmää. Yksi on suuri neliö, joka on jaettu 25 keskikokoiseen neliöön, ja jokainen keskikokoinen neliö on jaettu 16 pieneen neliöön (kuva 15-2); toinen on iso neliö. Neliöruudukko on jaettu 16 keskikokoiseen neliöön, ja jokainen keskikokoinen neliö on jaettu 25 pieneen neliöön. Riippumatta siitä, millainen laskutaulu on kyseessä, jokaisessa suuressa ruudussa on 400 pientä ruutua. Jokaisen suuren neliön sivun pituus on lmm, jolloin jokaisen suuren neliön pinta-ala on lmm2. Peitinlasin peittämisen jälkeen kansilasin ja lasin välinen korkeus on 0,lmm, joten laskentakammion tilavuus on 0,lmm3 (millilitran kymmenesosa). Kuva 15-1 Verisolulaskentataulun rakenne (1) Kuva 15-2 Verisolulaskentataulun rakenne (2) A. Etunäkymä; B. Pituusleikkaus; suurennettu neliöruudukko, suuri neliö keskellä on laskentakammio 1. Verisolut Laskentataulu; 2. Kansilasi; 3. Laskettaessa laskentakammiossa bakteerien kokonaismäärä lasketaan yleensä viidessä ruudussa, lasketaan sitten kunkin neliön keskiarvo ja kerrotaan sitten 25:llä tai 16:lla saadaksesi suuren neliön bakteerien kokonaismäärä muunnetaan sitten bakteerien kokonaismäärään 1 ml:ssa bakteeriliuosta. Oletetaan, että bakteerien kokonaismäärä viidessä keskimmäisessä neliössä on A ja bakteeriliuoksen laimennuskerroin on B. Jos se on laskentalevy, jossa on 25 keskimmäistä neliötä, niin bakteerien kokonaismäärä 1 ml:ssa bakteeriliuosta {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (kpl) Samalla tavalla, jos kyseessä on 16 neliön laskentalevy, bakteerien kokonaismäärä 1 ml:ssa bakteeriliuosta {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (kappaletta),
