Konfokaalimikroskoopin ja tavallisen optisen mikroskoopin vertailu
Mikroskooppi on tärkein työkalu solujen tarkkailuun. Valonlähteestä riippuen se voidaan jakaa kahteen luokkaan: optinen mikroskooppi ja elektronimikroskooppi. Edellinen käyttää valonlähteenä näkyvää valoa (ultraviolettimikroskoopilla ultraviolettivaloon), kun taas jälkimmäinen käyttää valonlähteenä elektronisuihkua. Tavallinen optinen mikroskooppi ja laserkonfokaalinen mikroskooppi kuuluvat samaan optiseen mikroskooppiin.
I. Yleinen optinen mikroskooppi
Tavallinen biologinen mikroskooppi koostuu kolmesta osasta, nimittäin: ① valaistusjärjestelmä, mukaan lukien valonlähde ja lauhdutin; ② optinen suurennusjärjestelmä, joka koostuu objektiiveista ja okulaareista, on mikroskoopin päärunko, pallopoikkeaman ja kromaattisen poikkeaman poistamiseksi okulaarit ja objektiivit koostuvat monimutkaisesta linssiryhmästä; ③ mekaaninen laite, jota käytetään materiaalin kiinnittämiseen ja mukavuuden huomioimiseen.
Mikroskoopin kohde on selkeä, ei vain määrää suurennus, vaan myös mikroskoopin erotuskyky (resoluutio), erotuskyky viittaa mikroskoopin (tai ihmissilmään kohteen 25cm) voi erottaa kohteen zui pienin välein kykyä Erotuskyvyn koon erottaminen määräytyy valon aallonpituuden ja peilin suunopeuden sekä väliaineen taitekertoimen perusteella, ilmaistuna kaavalla:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 missä: n=väliaineen taitekerroin;=peilin suukulma (objektiivin linssin suussa oleva näyte jännityskulmasta), NA=peilin suunopeus (numeerinen aukko). Peilin suukulman tulee aina olla pienempi kuin 180?, joten sina/2:n zui-arvo on välttämättä pienempi kuin 1.
Optisten linssien valmistuksessa käytetyn lasin taitekerroin on 1,65 ~ 1,78, käytetyn väliaineen taitekerroin, mitä lähempänä lasia, sitä parempi. Kuivan objektiivin linssin väliaine ilmalle, peilin suunopeus on yleensä 0.05 ~ 0,95; öljylinssi, jossa setriöljyä keskipitkällä, peilin suunopeus voi olla lähellä 1,5.
Tavallinen valon aallonpituus 400~700 nm, joten mikroskoopin erotuskyvyn arvo ei ole pienempi kuin 0,2 μm, ihmissilmän erotuskyky on 0,2 mm, joten mikroskoopin zui-suurennuksen yleinen rakenne on yleensä 1000X.
Toiseksi laserkonfokaalinen skannausmikroskooppi
Konfokaalinen laserpyyhkäisymikroskooppi (laserkonfokaalinen pyyhkäisymikroskooppi), jossa laser skannaavana valonlähteenä, piste pisteeltä, viiva riviltä, pinta pinnalta nopea skannauskuvaus, skannaava laser ja fluoresenssikokoelma yhteisestä objektiivista, objektiivipyyhkäisylasertarkennuspiste , mutta myös kohdepisteen hetkellinen kuvantaminen. Lasersäteen lyhyemmän aallonpituuden ansiosta säde on erittäin hieno, joten konfokaalilaserpyyhkäisymikroskoopilla on korkea resoluutio, noin 3 kertaa tavalliseen optiseen mikroskooppiin verrattuna. Järjestelmä tarkentuu kerran ja skannaus rajoittuu näytteen yhteen tasoon. Kun tarkennussyvyys ei ole sama, näytteestä voidaan saada eri syvyystasoisia kuvia ja nämä kuvatiedot tallennetaan tietokoneeseen, tietokoneanalyysin ja simuloinnin avulla voidaan näyttää solunäytteen kolmiulotteinen rakenne. .
