Biomikroskopia kudoslohkojen tilavuuden suhteen
Biologinen mikroskopia Toistaiseksi kylmäkiinnitys, jäädytetty ultraohut leike ja pakastekuivaus ovat rutiinimenetelmiä kudos- ja soluröntgenleikkauksissa. Tämän menetelmän yksityiskohdat selitetään seuraavasti:
Lauhduttimella varustetuissa biologisissa mikroskoopeissa lauhdutinta voidaan liikuttaa ylös ja alas, jotta kirkkaus saadaan kohtalaiseksi, ja myös säädettävän valon aukkoa voidaan muuttaa kohtuullisen 9b-kirkkauden saavuttamiseksi. Jos valo on aurinkoista, kondensaattoria voidaan nostaa sopivasti ylös ja säädettävän valonlähteen aukkoa voidaan suurentaa sopivasti. Jos valo on liian voimakasta, kondensaattorilinssiä voidaan laskea sopivasti ja risteävän valon aukkoa voidaan pienentää sopivasti. Jos tunnet silti häikäisevän tässä tapauksessa, voit valita sopivan suodattimen ja asettaa sen lauhduttimen alla olevaan kannakkeeseen. Tämä tammi pystyy saavuttamaan sinua tyydyttävän kirkkauden. Tietysti lauhduttimen ylä- ja ala-asennon säätäminen, muuttuvan optisen lukeman aukon koon säätäminen ja sopivan suodattimen valinta vaatii jonkin verran harjoittelua kokemuksen saamiseksi.
Erittäin tärkeä kysymys biologisessa mikroskopiassa on, että näytteenotossa ja solujen erottelussa, pakastekuivauksen ja hartsi upotuksen (FD), ultraohuiden kiviainesten pakastamisen ja pakastekuivauksen jälkeen kunkin osan 65 alkuaineen pitoisuus. on käsiteltävä huolellisesti. Analysoitavat solut eivät voi vaurioitua. Koska röntgenmikroanalyysi ei sisällä vain monia vaiheita, vaan myös maksaa paljon. Jos analysoitavat solut ovat vaurioituneita tai kuolleita soluja pitkän ajan ja monivaiheisen käsittelyn jälkeen, on erittäin valitettavaa tehdä vääriä johtopäätöksiä. Esimerkiksi kollagenaasikäsittelyllä erotetuilla sydänlihassoluilla on kaksi muotoa, joista toinen on pitkän sauvan muotoinen ja toinen pyöreä. Jälkimmäiset ovat kuolevia soluja, jotka vaurioituvat solun eristämisen aikana.
Biomikroskopia Elektrolyyttien määrä ja jakautuminen näissä kahdessa kennotyypissä ovat melko erilaisia. Na on erittäin korkea ja K on erittäin alhainen pyöreissä sydänlihassoluissa, ja ca:n pitoisuus sukkulamadoissa on erittäin korkea. Muilla analyysimenetelmillä tarkastelun jälkeen on osoitettu, että pyöreiden solujen korkea Na ja matala K sekä korkea Ca mitokondrioissa johtuvat solukalvon vaurioitumisesta solujen erotteluprosessin aikana. Solujen ja kudosten jääkylmä kiinnitysmenetelmä on yleensä ensin sammuttaa ja kiinnittää, minkä jälkeen ne varastoidaan nestetypessä. Sammutuskiinnitys on erittäin tärkeä säilöntävaikutuksen kannalta. Elävät solut tai tuoreet kudokset sisältävät runsaasti vettä. Sammutettaessa solujen tai kudosten osat, jotka ovat suorassa kosketuksessa murskatun kylmäaineen kanssa (etenkin nestemäisellä typellä sammutettaessa), jäätyvät ja kiinnittyvät usein ensin, jolloin muodostuu "kuori", joka estää Solujen keskiosien murskattu ja kylmäkiinnitetty. Siksi X-linjan mikroalueanalyysiä tehtäessä havaitaan usein, että suurempien solujen keskellä on jääkiteitä. Tämän estämiseksi kylmäaineena käytetään ainetta, jonka sulamispiste on korkeampi kuin nestemäisen typen mutta alhaisempi kuin 806c. Tällaisia aineita on monia, mutta halvin on tiivistetty propaani (kiehumispiste - 42,120c, sulamispiste - 187.10c, molekyylipaino 44,1), ja jäähdytysnopeus on nopein. Mutta sen haittana on, että se on syttyvä.
Biologinen mikroskooppi voi laittaa lihaskuidun erityiseen telineeseen niin, että kun lihassäiden supistuminen saavuttaa tietyn vaiheen ja se on korjattava, käynnistä heti suutin ruiskuttamaan nestemäistä propaania lihaskuituun sen sammuttamiseksi ja kiinnittämiseksi. Sitten lihaskuidut kehyksen kanssa otettiin pois ja laitettiin nestetyppeen. Jos kiinnität verisoluja tai eristettyjä soluja, keskitä solut ensin sentrifugoimalla alhaisella nopeudella, siirrä solut hopeapulloon, jolla on hyvä lämmönjohtavuus, aseta pullo nestemäiseen propaaniin ja pakasta kiinnitystä varten. Kun rotan haimaa kiinnitettiin Hall-laboratoriossa, kaksi teräspalaa esijäähdytettiin nestemäisellä heliumilla (tai nestetypellä), ja kaksi kuparipalaa puristettiin pihdeillä ja asetettiin haiman etu- ja takaosaan sammuttamaan ja kiinnittymään. haima. Kudoksia tai soluja voidaan säilyttää nestetypessä pitkäaikaista varastointia varten sammutuksen ja kiinnittämisen jälkeen.
Biologinen mikroskopia Arvostetuimman jäädytetyn ultraohuen leikkausmenetelmän lisäksi tässä on toinen tutkijoiden käyttämä kerrostustekniikka. Lisätään ainetta muodostamaan sedimentti analysoitavan komponentin kanssa sen immobilisoimiseksi ennen analyysiä, minkä jälkeen sedimentti analysoidaan. Esimerkiksi ihmiset käyttävät usein oksalaattia ja pyroantimonaattia ca:n tallettamiseen lihassoluihin. Edellinen ei ole tarpeeksi herkkä sytoplasman alhaiselle Ca-pitoisuudelle; pyroantimonaatti on herkempi ja voi muodostaa elektronitiheitä kerrostumia vapaan Ca kanssa aivoissa, mutta pyroantimonaatti ei ole yhteensopiva natriumin, mangaanin, bariumin, raudan kanssa. Myös kerrostumia muodostuu ja ne ovat vähemmän spesifisiä. Näytteen valmistusprosessi on samanlainen kuin tavallisten transmissioelektronimikroskoopin ultraohutleikkausnäytteiden valmistus, ero on siinä, että 3 prosenttia kaliumpyroantimonaattia (fosfaattipuskurisuolaliuos, pH 7,6) kiinnitettiin 6 tuntia ennen kiinnitystä, ja värjättyihin lihaksen ultraohut leikkeisiin, Mustia kerrostumia nähtiin kunkin sarkomeerin vyöhykkeiden A ja 2 keskiviivalla, ja värjäytymättömiä leikkeitä käytettiin röntgenmikroanalyysiin. Diaminobentsidiinitetrahydrokloridia (DAB) käytettiin hemipitoisten aineiden saostamiseen ja niin edelleen. Histokemiallisen saostusreaktion ja röntgenmikrodifferentiaatiosillan yhdistelmää voidaan harkita laboratorioissa, joissa ei ole jäädytettyjä ultraohuita leikkeitä. Puolikvantitatiivinen voidaan tehdä analysoitavien alkuaineiden piikin korkeuden mukaan
